JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:31 min. • April 30th, 2023
- Chemioterapia nowotworów jest na ogół ukierunkowana na komórki o wysokiej proliferacji, pozostawiając niewielką podgrupę populacji komórek macierzystych, co prowadzi do rekapitulacji guza. Te komórki macierzyste nazywane są populacją boczną. Ponieważ populacja boczna nie ma specyficznych markerów komórkowych, używamy testu wypływu barwnika, aby wyizolować je od innych komórek nowotworowych.
Na początek dodaj barwnik Hoechst do izolowanych komórek nowotworowych danio pręgowanego. Hoechst dostaje się do jądra i wiąże się z regionem bogatym w A-T w mniejszym rowku DNA. Populacja boczna komórek ma wyższe stężenie transporterów ABC na powierzchni, co prowadzi do szybkiego wypływu barwnika na zewnątrz komórki, wykazując niską fluorescencję.
Weź kolejną fiolkę z komórkami nowotworowymi leczonymi Hoesctem i dodaj do niej werapamil. Ta fiolka działa jako kontrola, ponieważ werapamil blokuje transportery ABC, powodując zmniejszenie wypływu hoechst, zwiększając w ten sposób fluorescencję w populacji bocznej.
Inkubować zarówno komórki kontrolne, jak i próbki w ciemności. Następnie przeciwdziałaj barwieniu komórek jodkiem propidyny, które dostają się wyłącznie do jądra martwych komórek i inte
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych