Szczepienie wysp trzustkowych: metoda wszczepiania wysp trzustkowych do przedniej komory oka myszy w celu obrazowania in vivo

- Wyspy trzustkowe zawierają komórki beta, które wydzielają insulinę. U pacjentów z cukrzycą typu 1 komórki beta wytwarzające insulinę stają się dysfunkcyjne. Przeszczep wysp trzustkowych u takich pacjentów daje możliwość zapewnienia kontroli glikemii. Aby ocenić skuteczność przeszczepu, wykorzystujemy modele zwierzęce, takie jak mysz, której przednia komora oka jest optymalnym miejscem do szczepienia i obrazowania in vivo.

W celu przeszczepienia wysp trzustkowych umieść znieczuloną mysz na ciepłej poduszce grzewczej i wstrzyknij podskórnie buprenorfinę, środek przeciwbólowy łagodzący ból, z tyłu myszy. Następnie włóż nos myszy do maski na nos, aby zapewnić ciągły dopływ tlenu i znieczulającego izofluranu.

Zamocuj głowę myszy w uchwycie głowy, aby odsłonić oko i delikatnie cofnij powiekę za pomocą kleszczy, aby wysunąć oko. Załaduj kaniulę fluorescencyjnie znakowanymi wysepkami. Włóż pół końcówki kaniuli do rogówki. Podnieś rogówkę, delikatnie dozuj wysepki, wyjmij kaniulę i nałóż żel pod oczy.

Po upływie żądanego czasu umieść mysz pod mikroskopem dwufotonowym i zrób zdjęcia. Można zaobserwować naczynia krwionośne tworzące sieć mikronaczyniową w całym przeszczepie. W poniższym protokole wykonamy przeszczep ludzkich wysp trzustkowych do przedniej komory oka myszy.

Aby rozpocząć, umieść mysz na ciepłej poduszce grzewczej, umieść ją w uchwycie na głowę i załóż maskę na nos. Użyj kciuka i palca wskazującego, aby lekko podnieść głowę. Przymocuj go za pomocą metalowych elementów po bokach, upewniając się, że nauszniki mocują głowę bezpośrednio pod uszami. Podskórnie wstrzyknąć roztwór buprenorfiny w grzbiet myszy. Delikatnie cofnij powieki oka, które ma być przeszczepione, za pomocą kleszczy. Wysuń oko i luźno przymocuj je pęsetą pokrytą rurką polietylenową.

Po przeniesieniu wysp trzustkowych na szalkę Petriego z PBS, zbierz około 20 do 30 wysepek w kaniuli oka. Za pomocą igły o rozmiarze 25 skośnie do góry, ostrożnie włóż końcówkę do rogówki i wykonaj pojedyncze boczne nacięcie. Ostrożnie podnieś rogówkę z kaniulą wstępnie załadowaną wyspami trzustkowymi i powoli uwolnij wysepki do oka. Powoli schuj kaniulę i nałóż żel pod oczy na oko.

Po 10 minutach zdejmij kleszcze przytrzymujące powiekę i ustaw oko z powrotem w normalnej pozycji. W przypadku obrazowania wszczepionych ludzkich wysp trzustkowych za pomocą mikroskopii dwufotonowej należy umieścić platformę uchwytu głowy pod mikroskopem i nanieść żel do oczu na oko w postaci płynu zanurzającego między rogówką a soczewką. Umieść oko pod obiektywem i wyobraź sobie wszczepione ludzkie wysepki zgodnie z opisem w rękopisie tekstowym.