Nieodwracalna elektroporacja: technika ablacji guza trzustki u myszy

- Nieodwracalna elektroporacja lub IRE to technika ablacji guzów trzustki poprzez podawanie krótkich, wysokonapięciowych impulsów prądu elektrycznego do guza, powodując trwałe uszkodzenie komórek nowotworowych. IRE ma wysoką selektywność i dostępność dla docelowego obszaru guza. Nie powoduje uszkodzeń pobliskich zdrowych komórek wywołanych ciepłem, co czyni go obiecującą terapią przeciwnowotworową.

Zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy na boku i przeprowadź sekcję jej jamy brzusznej, aby zlokalizować guz na powierzchni trzustki. Następnie użyj elektrod, zamykając miejsce guza i podawaj ukierunkowane impulsy prądu elektrycznego przez żądany czas. Prąd elektryczny powyżej pewnego progu powoduje trwałe pory w błonie komórkowej komórek nowotworowych, uniemożliwiając komórce powrót do stanu homeostazy.

Pory te powodują, że zawartość wewnątrzkomórkowa komórki wydostaje się na zewnątrz, co prowadzi do stopniowej śmierci komórki w wyniku apoptozy. Teraz zamknij jamę brzuszną i pozostaw mysz do wyzdrowienia w klatce domowej. Na koniec monitoruj trzustkę pod kątem zmniejszenia rozmiaru guza, po elektroporacji. W poniższym protokole zademonstrujemy metodę wykonywania nieodwracalnej elektroporacji w celu zakłócenia guzów trzustki myszy.

- Zanim guz osiągnie średnicę 6 milimetrów, umieść znieczulone zwierzę na prawym boku, aby umożliwić dostęp do guza i użyj maszynki do strzyżenia i wacika nasączonego alkoholem, aby oczyścić miejsce guza. Za pomocą kleszczy podnieś skórę bezpośrednio pod guzem i wprowadź dwie elektrody igłowe przez skórę, równolegle do ciała, aby zamknąć guz, uważając, aby elektrody nie przeniknęły do jamy otrzewnej.

Ustaw elektroporator tak, aby dostarczał impulsy o długości 100 mikrosekund, o częstotliwości 1 Hz, przy napięciu 1,500 woltów na centymetr, co daje łącznie 150 impulsów i użyj pedału nożnego do dostarczania impulsów, oddzielając każdy zestaw 10 impulsów przez 10 sekund, aby umożliwić rozpraszanie ciepła między każdym zestawem impulsów.

- Ponieważ drganie mięśni występuje podczas porodu IRE i jest bardziej wyraźne podczas początkowego zestawu impulsów, upewnij się, że elektrody są nadal w pożądanym miejscu i że zwierzę jest nadal uspokojone po każdym zestawie impulsów.

- Po nie więcej niż 200 sekundach dozowania wyjmij elektrody i zapisz rzeczywiste dostarczone napięcie, zgodnie z wyświetlaczem na elektroporatorze. Następnie umieść mysz z powrotem w klatce. W przypadku IRE guza ortotopowego, 8 do 10 dni po implantacji guza, użyj kleszczy z nosem, aby uzewnętrznić guz za pomocą kleszczy i mocno uchwyć guz za pomocą platynowych elektrod pęsety.

Dostarcz impulsy elektroporacji, jak właśnie pokazano, utrzymując guz w eksternalizacji przez ostatni zestaw impulsów przez co najmniej 60 sekund, aby monitorować wszelkie oznaki krwotoku. Następnie należy przywrócić guz do jamy brzusznej i zamknąć nacięcie, jak pokazano, monitorując zwierzę aż do całkowitego wyzdrowienia.