JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:35 min. • April 30th, 2023
- Krążenie jelitowo-wątrobowe kwasów żółciowych, czyli BA, utrzymuje homeostazę w organizmie. Komórki wątroby lub hepatocyty wytwarzają BA, skąd przemieszczają się w kierunku jelita krętego i są aktywnie transportowane wewnątrz komórek jelitowych lub ileocytów. Wewnątrz ileocytów BA aktywują syntezę hormonu czynnika wzrostu fibroblastów lub FGF. FGF jest transponowany z powrotem do wątroby przez żyłę wrotną wątroby i wiąże receptory na hepatocytach, wysyłając w ten sposób dalszy sygnał ujemnego sprzężenia zwrotnego w celu wyłączenia produkcji BA.
Resekcja jelita krętego jest powszechną strategią leczenia raka jelita grubego. Dlatego przygotowujemy mysi model resekcji jelita krętego, aby uzyskać wgląd w rolę jelita krętego w raku jelita grubego.
Zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy na desce sekcyjnej i wykonaj nacięcie brzucha w linii środkowej. Następnie należy odsłonić jelito kręte i wyciąć wybrany odcinek jelita krętego i zszyć końce jelita krętego razem. Na koniec należy przywrócić jelito zespoleniowe w jamie brzusznej i zszyć nacięty mięsień i warstwę skóry.
Pozwól myszy dojść do siebie i przeanalizować skutki usunięcia jelita krętego, które może powodować nadmierną akumulację żółci w jelitach. W poniższym protokole przygotujemy mysi model resekcji jelita krętego w celu zbadania wpływu hormonu FGF jelita krętego na metabolizm żółci.
- Zacznij od potwierdzenia odpowiedniego poziomu sedacji poprzez uszczypnięcie palca u nogi i nałożenie kremu do depilacji na brzuch myszy. Usuń sierść za pomocą gąbek chirurgicznych i umieść zwierzę na stole chirurgicznym dla małych zwierząt o kontrolowanej temperaturze, ustawionym na 37 stopni Celsjusza. Nałóż maść na oczy zwierzęcia i zdezynfekuj odsłoniętą skórę sekwencyjnym peelingiem powidonowo-jodowym i 70% etanolowym.
Przykryj obszar chirurgiczny brzucha sterylną gazą chirurgiczną i za pomocą skalpela wykonaj nacięcie w linii środkowej brzucha i przetnij warstwę mięśniową. Używając aplikatora z bawełnianą końcówką w celu ochrony jelit, całkowicie otwórz mięśnie brzucha myszy za pomocą retraktorów, aby odsłonić jamę brzuszną.
Zaczynając od jelita ślepego, ostrożnie przesuń połączone jelito kręte i część jelita czczego z jamy brzusznej i użyj jedwabnego szwu 7-0, aby podwiązać górną gałąź tętnicy krezkowej górnej. Gdy kolor tkanki zmieni się z różowego na ciemny, wskazując na pełną okluzję, użyj nożyczek, aby wyciąć 50% lub 90% jelita krętego, w zależności od parametrów eksperymentu.
Przepłucz światło obu końców jelita krętego 0,9% soli fizjologicznej. Po zlokalizowaniu krezki po stronie obu końców jelita krętego, wyrównaj krezki na obu końcach wyciętej tkanki i użyj 8-0 szew, aby połączyć końce ze sobą. Zszyj przeciwległą stronę jelita krętego, aby utrzymać zespolenie jelita krętego w naturalny sposób i zszyj górną i dolną stronę między dwoma oryginalnymi szwami, aby dokładnie połączyć dwa końce jelita krętego.
Po stwierdzeniu braku wycieku z miejsca zespolenia należy przywrócić jelito ślepe i jelito cienkie do ich pierwotnych lokalizacji anatomicznych i igłą przemyć obszar operowany ciepłą solą fizjologiczną o stężeniu 0,9%. Zamknij warstwę mięśni brzucha szwem 6-0 i wyrównaj nacięcie skóry brzucha, aby zamknąć skórę i ułatwić optymalne gojenie się ran.
Następnie przenieś mysz na oddział intensywnej terapii w klatce z papierowej ściółki na poduszce grzewczej o kontrolowanej temperaturze, aby zapewnić sobie nocną regenerację z miękkim jedzeniem oprócz zwykłego jedzenia i wody.