Indukowany chemicznie dwuetapowy model kancerogenezy skóry: eksperymentalny mysi model raka skóry in vivo

- W eksperymentalnych modelach nowotworowych myszy indukowany rak u zwierzęcia przypomina fenotyp raka ludzkiego. Stanowią one skuteczną platformę do oceny skuteczności potencjalnych terapii. Aby wywołać dwuetapowy model kancerogenezy skóry, najpierw przygotuj znieczuloną mysz z obniżoną odpornością w pozycji leżącej. Ogol jego futro, aby odsłonić skórę znajdującą się pod spodem. W pierwszym kroku nałóż silny środek inicjujący nowotwór na odsłoniętą skórę grzbietową.

Te mieszki włosowe w fazie spoczynku lub telogenu zawierają nieaktywne gruczoły łojowe. Wynikający z tego brak przepływu sebum pozwala na gromadzenie się związku w tych mieszkach włosowych. Związek dyfunduje do otaczających komórek i indukuje mutację genu docelowego, głównie w komórkach macierzystych mieszków włosowych lub pierwotnych komórkach macierzystych keratynocytów. Zmieniona ekspresja genów powoduje inicjację guza w tych komórkach.

W drugim kroku należy kilkakrotnie nałożyć odpowiedni środek stymulujący wzrost guza na skórę grzbietową w pożądanych odstępach czasu. Substancja chemiczna stymuluje ekspansję zainicjowanej populacji komórek. Ciągła proliferacja komórek prowadzi do powstawania rakotwórczych wyrostków zwanych brodawczakami.

W poniższym protokole pokazujemy generowanie dwuetapowego mysiego modelu kancerogenezy skóry przy użyciu substancji chemicznych DMBA, mutagenu i TPA, środka stymulującego wzrost.

- Przed rozpoczęciem eksperymentu umieść agresywne myszy w wieku od 7 do 9 tygodni w oddzielnych klatkach, aby uniknąć walki i zmian skórnych. W celu indukcji brodawczaka skórnego najpierw należy ogolić skórę grzbietów zwierząt doświadczalnych i zważyć myszy indywidualnie. Czterdzieści osiem godzin po goleniu za pomocą pipety nałóż 50 mikrogramów DMBA w 200 mikrolitrach acetonu na ogolony obszar każdej znieczulonej myszy.

W celu promocji brodawczaka skórnego, siedem dni po zastosowaniu DMBA, potraktuj skórę 5 mikrogramami TPA w 200 mikrolitrach acetonu, dwa razy w tygodniu do końca eksperymentu. Badaj zwierzęta pod kątem brodawczaków i co tydzień fotografuj i zapisuj rozmiar każdego brodawczaka na mapie.

Wyczuwalna masa o średnicy większej niż 1 milimetr jest uważana za brodawczaka, jeśli utrzymuje się dłużej niż tydzień.