JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:45 min. • April 30th, 2023
- Czynniki transkrypcyjne to białka zawierające domeny wiążące DNA. Wiążą się ze specyficznymi sekwencjami DNA i pomagają regulować ekspresję genów w komórkach. Aby wykryć ekspresję czynnika transkrypcyjnego w melanocytach związanych z łuskami, najpierw zbierz ciemne pigmentowane łuski grzbietowe od znieczulonego danio pręgowanego. Napraw łuski i potraktuj je roztworem przepuszczalnym, aby poszczególne melanocyty stały się przepuszczalne.
Potraktuj roztworem wybielacza, aby usunąć ciemne granulki pigmentu melaniny z komórek. Ten proces wybielania eliminuje ryzyko wystąpienia sygnałów tła związanych z pigmentem podczas kolejnych etapów barwienia. Inkubować z roztworem blokującym zawierającym białka w celu zablokowania niespecyficznych miejsc wiązania białek na powierzchni komórki.
Teraz potraktuj próbkę pożądanymi przeciwciałami pierwszorzędowymi. Przeciwciała te wiążą się z docelowymi czynnikami transkrypcyjnymi w komórkach. Następnie oznacz próbkę znakowanymi fluorescencyjnie przeciwciałami drugorzędowymi specyficznymi dla przeciwciał pierwszorzędowych. Dodatkowo potraktuj próbkę odpowiednim fluorescencyjnym barwnikiem wiążącym DNA w celu wybarwienia jąder komórkowych. Użyj mikros
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych