JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:30 min • March 4th, 2025
Uzyskaj chemicznie utrwaloną tkankę rdzenia kręgowego od myszy indukowanej demielinizacją autoimmunologiczną w określonych punktach czasowych podczas postępu choroby.
Choroba pobudza autoreaktywne komórki odpornościowe do atakowania białek mieliny, degradując osłonkę mielinową otaczającą aksony neuronów.
Komórki prekursorowe oligodendrocytów są rekrutowane do dotkniętego miejsca, dojrzewają do oligodendrocytów i reformują osłonkę mielinową.
Przepłucz tkankę buforem, aby usunąć nadmiar utrwalacza, a następnie potraktuj ją osmem, który wiąże się z lipidami mieliny i zwiększa kontrast do obrazowania.
Zastosuj plamy z metali ciężkich, które wiążą się z makrocząsteczkami i zwiększają kontrast.
Odwodnić tkankę za pomocą zwiększającego stężenia alkoholu. Weź tkankę zatopioną w żywicy i uzyskaj ultracienkie skrawki.
Za pomocą mikroskopii elektronowej zmierz grubość osłonki mielinowej, aby sklasyfikować aksony jako demielinizujące się ze spuchniętą, grubszą osłonką, zdemielinizowane bez osłonki lub remielinizujące się z cienką osłonką.
Zidentyfikuj uszkodzenie aksonów charakteryzujące się zmniejszonymi odstępami między neurofilamentami a obrzękiem mitochondriów lub całkowitym zwyrodnieniem.
Analizuj postęp uszkodzenia aksonów i naprawy w czasie, aby ocenić postęp choroby.