JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:25 min. • March 4th, 2025
Weź stałe odcinki nerwu wzrokowego od szczura kontrolnego i szczura z uszkodzeniem nerwu wzrokowego.
W sekcji kontrolnej znajdują się aksony z ciasno upakowanymi osłonkami mielinowymi zawierającymi koncentryczne warstwy błony plazmatycznej. Uszkodzona sekcja wykazuje zdezagęszczoną mielinę z dużymi przerwami.
Inkubuj z kompleksem osmowo-żelazocyjankowym, który wiąże się z lipidami i wzmacnia kontrast osłonki mielinowej.
Potraktuj tiokarbohydrazydem, aby stworzyć dodatkowe miejsca wiązania osmu.
Ponownie nałóż osm, aby jeszcze bardziej zwiększyć kontrast lipidowy.
Barwnik metalami ciężkimi, które wiążą się z makrocząsteczkami i zwiększają kontrast strukturalny
.Odwodnić za pomocą zwiększającego stężenia alkoholu i spłukać acetonem w celu zatopienia żywicy.
Osadź tkankę w żywicy i pokryj ją złotem, aby poprawić jakość obrazu.
Użyj seryjnej skaningowej mikroskopii elektronowej z blokową powierzchnią, aby jednocześnie ciąć i obrazować. Skoncentruj wiązkę elektronów na powierzchni i wykryj elektrony rozproszone wstecznie, aby wygenerować obrazy.
Osłonki mielinowe wydają się ciemne, podczas gdy przestrzenie w uszkodzonych osłonkach wydają się jaśniejsze, co pozwala na rozróżnienie między normalną a uszkodzoną mieliną.