JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:30 min. • March 4th, 2025
Weźmy szczura poddanego ograniczonemu przepływowi krwi do prawej półkuli mózgu, co powoduje uszkodzenie bariery krew-mózg.
Dożylnie wstrzyknąć albuminę znakowaną fluoroforem, która przechodzi przez uszkodzoną barierę krew-mózg, docierając do mózgu.
Uzyskaj chemicznie utrwalone skrawki mózgu.
Dodaj bufor blokujący, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych.
Zastosuj przeciwciała sprzężone z peroksydazą skierowane do albuminy znakowanej fluoroforem.
Dodaj substrat chromogenny, który peroksydaza przekształca w osad o dużej gęstości elektronów.
Wprowadź tetratlenek osmu, aby utrwalić lipidy błonowe i zwiększyć kontrast.
Odwodnić skrawki o rosnącym stężeniu alkoholu.
Dodaj octan uranylu, który wiąże się z kwasami nukleinowymi i białkami w celu zwiększenia kontrastu.
Ponownie odwodnić wraz ze wzrostem stężenia alkoholu, kończąc tlenkiem propylenu do zatapiania w żywicy. Osadź sekcje w żywicy.
Mikroskopowo zidentyfikuj i wytnij obszary zabarwione chromegenem.
Ponownie zanurz te sekcje w żywicy i przygotuj ultracienkie plasterki.
Zamontuj plasterki na siatkach mikroskopii elektronowej (EM).
Barwnik z cytrynianem ołowiu w celu zwiększenia kontrastu macierzy zewnątrzkomórkowej.
Kontynuuj z EM, aby zbadać integralność BBB.