JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:23 min. • March 4th, 2025
Weź nawodniony fragment chorej ludzkiej tkanki mózgowej zawierającej ciała Lewy'ego lub LB.
Inkubować w roztworze nadtlenku wodoru, aby zahamować endogenne peroksydazy i zapobiec niespecyficznemu barwieniu.
Podgrzej sekcję w buforze cytrynianowym, aby zdemaskować epitopy alfa-synukleiny w LBs.
Zastosuj środek blokujący, aby zapobiec nieswoistemu wiązaniu przeciwciał.
Usunąć nadmiar środka blokującego i inkubować sekcję z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko alfa-synukleinie.
Zmyć niezwiązane przeciwciała.
Zastosuj biotynylowane przeciwciała drugorzędowe, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Usuń nadmiar przeciwciał.
Dodaj kompleksy streptawidyna-biotyna-peroksydaza, które wiążą się z biotynylowanymi przeciwciałami drugorzędowymi.
Zmyj niezwiązane kompleksy.
Zastosuj podłoże barwiące, które reaguje z peroksydazą, tworząc brązowe osady.
Usuń nadmiar podłoża.
Potraktuj przeciwbarwnikiem, aby zabarwić jądra na niebiesko, zwiększając kontrast z brązowo zabarwioną alfa-synukleiną w LB w cytoplazmie neuronalnej pod mikroskopem.