JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:29 min • March 4th, 2025
Zacznij od wycinka mózgu bogatego w neurony dopaminergiczne.
Inkubować wycinek w płynie CSF zawierającym fluorescencyjne fałszywe neuroprzekaźniki lub FFN.
FFN to markery wrażliwe na pH, które naśladują dopaminę i intensywniej fluoryzują w środowisku obojętnym niż kwaśnym.
Te FFN selektywnie wnikają do neuronów dopaminergicznych i są ładowane do kwaśnych pęcherzyków synaptycznych, gdzie zmiana pH zmniejsza fluorescencję FFN.
Przenieś ten plasterek do komory obrazowania, zabezpiecz go i stale perfuzuj za pomocą CSF, aby usunąć niezwiązane FFN.
Zobrazuj wycinek, aby potwierdzić akumulację FFN jako fluorescencyjną puncta.
Następnie umieść elektrodę stymulującą, aby dostarczyć stymulację elektryczną.
Impulsy elektryczne powodują, że wapń dostaje się do neuronu, powodując fuzję pęcherzyków synaptycznych z błoną neuronalną i uwalnianie FFN do zewnątrzkomórkowej szczeliny synaptycznej.
W środowisku o neutralnym pH szczeliny synaptycznej nasila się fluorescencja FFN.
Ponownie zobrazuj wycinek, aby zaobserwować rozproszoną fluorescencję w przestrzeni zewnątrzkomórkowej, potwierdzając uwalnianie FFN z pęcherzyków synaptycznych.