JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:17 min. • March 4th, 2025
Siarczan heparanu, glikozaminoglikan, jest obecny w blaszkach amyloidowych związanych z chorobą Alzheimera.
Aby uwidocznić siarczan heparanu, zacznij od chorego ludzkiego wycinka tkanki hipokampa zawierającego blaszki amyloidowe.
Napraw wycinek tkanki za pomocą utrwalacza, aby zachować struktury komórkowe.
Następnie potraktuj tkankę środkiem blokującym, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Dodaj niejonowy detergent, aby przepuszczalność błon komórkowych.
Inkubuj tkankę z pierwszorzędowymi przeciwciałami, które specyficznie celują w siarczan heparanu w blaszkach amyloidowych.
Zmyć niezwiązane przeciwciała pierwszorzędowe.
Następnie dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, które wiążą się z pierwszorzędowymi przeciwciałami przyłączonymi do siarczanu heparanu.
Usunąć wszelkie niezwiązane przeciwciała.
Wybarwić jądra za pomocą barwnika fluorescencyjnego.
Na koniec użyj mikroskopu fluorescencyjnego, aby uwidocznić znakowany fluorescencyjnie siarczan heparanu w blaszkach amyloidowych i niebieskich jądrach w chorym wycinku tkanki.