JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:29 min • March 4th, 2025
Zacznij od wspólnej hodowli astrocytów i różnicowania agregatów neuronalnych komórek macierzystych w pożywkach różnicujących.
Astrocyty wydzielają cząsteczki sygnałowe, które przyspieszają dojrzewanie i różnicowanie komórek macierzystych w neurony i astrocyty.
Następnie dodaj utrwalacz, aby zachować strukturę komórkową, a następnie umyj.
Dodaj roztwór detergentu, aby przepuszczalnie błony komórkowe, a następnie umyj.
Wprowadź odczynnik blokujący, aby zablokować niespecyficzne miejsca wiązania.
Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe, które specyficznie wiążą się z markerami białkowymi dojrzałych neuronów i astrocytów. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Następnie dodać zielone i czerwone fluorescencyjnie znakowane przeciwciała drugorzędowe i inkubować. Przeciwciała te wiążą się z odpowiednimi przeciwciałami pierwotnymi, zapewniając komórkom wyraźną fluorescencję.
Wprowadź barwnik jądrowy, aby zabarwić jądra na niebiesko.
Na koniec obserwuj komórki za pomocą mikroskopu konfokalnego.
W agregatach zielone komórki fluorescencyjne wskazują dojrzałe neurony, podczas gdy czerwone komórki fluorescencyjne reprezentują astrocyty. Potwierdza to interakcje komórka-komórka w ułatwianiu dojrzewania neuronów.