JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:24 min. • August 7th, 2025
Weźmy biodrukowane konstrukty mięśni szkieletowych.
Konstrukty te zawierają filary hydrożelu fibrynowego z osadzonymi włóknami mięśniowymi i mikrosferami.
Mikrosfera jest porowatą strukturą polimerową otaczającą czynniki neurotroficzne.
Weźmy zwoje korzenia grzbietowego wyizolowane z zarodków piskląt.
Umieść jeden ganglion na każdym konstrukcie i wysiaduj.
Czynniki neurotroficzne są uwalniane z mikrosfer w kontrolowanym stężeniu fizjologicznym, ułatwiając kiełkowanie wypustek z neuronów zwanych neurytami.
Dodaj utrwalacz, aby naprawić konstrukty.
Przemyć buforem i dodać roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Inkubuj z pierwszorzędowymi przeciwciałami, które wiążą się specyficznie z neurytem.
Przepłukać buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała drugorzędowe, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Przemyć buforem w celu usunięcia nadmiaru przeciwciał.
Zamontuj konstrukcję za pomocą pożywki montażowej zawierającej barwnik jądrowy i szkiełko nakrywkowe.
Pod mikroskopem konfokalnym wizualizuj wzrost neurytów.