JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:37 min. • August 7th, 2025
Zacznij od pierwotnej hodowli śródmózgowia z zarodków szczurów, zawierających neurony dopaminergiczne, które nadmiernie eksprymują zmutowaną alfa-synukleinę.
Zastąp pożywki w studzienkach uzdatniających świeże pożywki zawierające badany związek, a pożywki w studzienkach kontrolnych zwykłą pożywką. Następnie inkubować.
W grupie kontrolnej alfa-synukleina tworzy toksyczne agregaty w neuronach dopaminergicznych, powodując retrakcję neurytów i prowadząc do śmierci neuronów.
W leczeniu badany związek oddziałuje z alfa-synukleiną, zapobiega jej agregacji, zachowuje strukturę neurytową i zapewnia neuroprotekcję.
Napraw i przepuszczalność komórek, a następnie zablokuj niespecyficzne miejsca wiązania.
Inkubuj z przeciwciałami pierwotnymi, aby oznaczyć wszystkie neurony, z dodatkowym znakowaniem neuronów dopaminergicznych.
Umyj komórki i dodaj znakowane fluoroforem przeciwciała drugorzędowe specyficzne dla przeciwciał pierwszorzędowych.
Używając odwróconego mikroskopu fluorescencyjnego, policz różnicowo znakowane neurony dopaminergiczne, a następnie przełącz się na mikroskop konfokalny, aby zmierzyć długość neurytów.
Większa liczba neuronów dopaminergicznych z nienaruszonymi neurytami w leczeniu w porównaniu z grupą kontrolną potwierdza potencjał neuroprotekcyjne badanego związku.