JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:24 min. • August 29th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy na stereotaktycznej ramie z pochyloną głową.
Nacięcie skóry głowy u myszy odsłania oponę twardą pokrywającą cisterna magna, płyn mózgowo-rdzeniowy lub wypełnioną płynem mózgowo-rdzeniowym przestrzeń między móżdżkiem a pniem mózgu.
Za pomocą kleszczy chwyć oponę twardą i utwórz w niej mały otwór, aby uzyskać dostęp do cisterna magna.
Użyj sterylnego wacika, aby usunąć nadmiar płynu mózgowo-rdzeniowego.
Zidentyfikuj anatomiczny punkt odniesienia, w którym rdzeń kręgowy łączy się z pniem mózgu, a następnie określ współrzędne stereotaktyczne.
Opuść ramię stereotaktyczne trzymające mikropipetę, która zawiera roztwór terapeutyczny.
Przeprowadź mikropipetę przez cisterna magna do pnia mózgu we wcześniej określonych współrzędnych.
Powoli wstrzykiwać roztwór i krótko trzymać pipetę, aby zapobiec cofaniu się.
Rozwiązanie terapeutyczne dociera bezpośrednio do obszarów pnia mózgu i górnej części rdzenia kręgowego, do których trudno dotrzeć przy użyciu standardowych metod stereotaktycznych.
Zobacz grzbietową powierzchnię pnia mózgu ze szczegółowymi punktami orientacyjnymi przez otwartą oponę twardą.
Użyj kątowych kleszczy, aby chwycić oponę twardą rozciągającą się od kości potylicznej do atlasu, a następnie użyj nożyczek sprężynowych, aby zrobić mały otwór o długości około 0,5 do 1,5 milimetra w oponie twardej. Po otwarciu opony twardej spuść nadmiar płynu mózgowo-rdzeniowego za pomocą sterylnej końcówki higienicznej. Zasuwka, punkt, w którym kanał centralny otwiera się do czwartej komory, jest standardowym przednio-tylnym i przyśrodkowym punktem zerowym.
Ustawić pipetę lub strzykawkę w kierunku celu za pomocą ramienia stereotaktycznego. Opuść ramię grzbietu na powierzchnię grzbietową, która tworzy się z grzbietowo-brzusznego punktu zerowego. Następnie opuść pipetę na pień mózgu i wstrzyknij roztwór.
Pozostawić igłę na miejscu przez jedną do pięciu minut po wstrzyknięciu, aby uniknąć śladu igły w przypadku stosowania objętości od 3 do 50 nanolitrów. Następnie podnieś pipetę lub strzykawkę za pomocą ramienia stereotaktycznego i powtórz tę czynność dla wielu celów.