JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:30 min. • August 29th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy z ekspresją genu markera fluorescencyjnego i zabezpieczonej w ramce stereotaktycznej.
Głowa jest pochylona w dół, aby ułatwić dostęp do cisterna magna, płynu mózgowo-rdzeniowego lub wypełnionej płynem mózgowo-rdzeniowym przestrzeni między móżdżkiem a pniem mózgu.
Nałóż maść na oczy, ogol szyję i wysterylizuj.
Wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić błonę pokrywającą cisterna magna.
Cofnij tkanki za pomocą separatora, aby uzyskać dostęp do cisterna magna.
Weź mikrostrzykawkę wypełnioną induktorem i wyposażoną w wygiętą igłę.
Włóż igłę i nakłuj membranę, aby dotrzeć do cisterna magna.
Lek należy wstrzykiwać powoli, aby uzyskać równomierne rozproszenie w płynie mózgowo-rdzeniowym.
Lek dostaje się do komórek powierzchniowych mózgu i wyzwala ekspresję genu markerowego, wytwarzając białka czerwonej fluorescencji.
Przepływ płynu mózgowo-rdzeniowego zapobiega dyfuzji leku do głębszych obszarów mózgu.
Obrazowanie fluorescencyjne potwierdza selektywne znakowanie komórek powierzchniowych, wykazując celowe dostarczanie leku do regionów narażonych na płyn mózgowo-rdzeniowy.
Znieczulić zwierzę w komorze izofluranu.
Następnie wyreguluj uchwyt głowicy myszy tak, aby ustnik znajdował się pod kątem około 30 stopni od powierzchni stołu operacyjnego i przymocuj głowę zwierzęcia do uchwytu. Aby poprawić dostęp do cisterna magna, ustaw ciało zwierzęcia pod kątem około 30 stopni od powierzchni stołu z głową pochyloną w dół, co utworzy kąt 120 stopni z resztą ciała i przedłuży tył szyi, aby ułatwić dostęp do cisterna magna. Gdy zwierzę zostanie prawidłowo ustawione, nałóż maść okulistyczną, ogol tył szyi i zdezynfekuj obszar chusteczkami nasączonymi alkoholem i Betadine.
Użyj nożyczek chirurgicznych, aby wykonać nacięcie w linii środkowej, zaczynając na poziomie kości potylicznej i rozciągając się do tyłu. Delikatnie oddziel powierzchowną tkankę łączną i mięśnie szyi, pociągając na boki od linii środkowej pęsetą z cienką końcówką, która odsłoni błonę opony twardej pokrywającą cisterna magna. Umieść mały separator chirurgiczny, aby umożliwić wizualizację cisterna magna przez cały zabieg.
Zidentyfikuj ogonowy koniec kości potylicznej i włóż wcześniej zgiętą igłę bezpośrednio pod spód. Po perforacji opony twardej pozwól, aby wygięta końcówka igły wniknęła pod powierzchnię, delikatnie pociągając strzykawkę w górę i równolegle do ciała zwierzęcia, co zapewni lepszą stabilność. Wstrzyknij związek powoli, aby uniknąć zakłóceń w naturalnym przepływie płynu mózgowo-rdzeniowego.
Po wstrzyknięciu należy pozostawić igłę w środku na minutę, a następnie ostrożnie usunąć ją za pomocą kleszczyków z cienką końcówką.