Stereotaktyczny przeszczep zawiesiny komórek nerwowych myszy z urazowym uszkodzeniem mózgu

Rozpocząć od wstępnie załadowanej strzykawki podłączonej do stereotaktycznej pompy strzykawkowej.

Strzykawka zawiera indukowaną przez człowieka pluripotencjalną zawiesinę komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych.

Umieść igłę nad chirurgicznie odsłoniętą korą mózgową myszy z urazowym uszkodzeniem mózgu.

Opuść strzykawkę, aby dotknąć opony twardej końcówką igły, dostosuj współrzędne, aby celować w miejsce urazu i lekko się wycofaj. Teraz,utwórz

małe nacięcie, ustanawiając punkt wejścia dla igły.

Następnie należy obniżyć tłok, aby umożliwić przepływ zawiesiny komórek.

Opuść igłę i przeniknij do mózgu, aby dotrzeć do granicy istoty szarej i białej kory głębokiej.

Na koniec powoli wlej zawiesinę komórkową, jednocześnie nawadniając miejsce operacji solą fizjologiczną, aby utrzymać nawodnienie.

Po zakończeniu wyjmij igłę, ponownie przepłukaj i zamknij nacięcie.

Z biegiem czasu przeszczepione komórki dojrzewają, przywracają obwody nerwowe i naprawiają uszkodzenia mózgu.

Około 24 godziny po kraniektomii umieść mysz z powrotem w ramce stereotaktycznej.

Przykryj mysz zasłoniętą zasłoną chirurgiczną. Przepłukać miejsce nacięcia sterylną solą fizjologiczną, aby oczyścić miejsce i poluzować szwy. Użyj wacika nasączonego 70% etanolem, aby delikatnie wysterylizować miejsce nacięcia i użyj cienkiej pęsety i nożyczek okulistycznych, aby usunąć szwy.

Następnie przepłukać miejsce operacji i kraniektomii dużą ilością sterylnej soli fizjologicznej. W kapturze bezpieczeństwa biologicznego do hodowli komórkowej delikatnie zakręć lub postukaj w rurkę z komórkami, aby zapewnić jednorodną zawiesinę komórek. Za pomocą mikropipety załadować około 7,5 mikrolitra komórek do strzykawki Hamiltona przez końcówkę tłoka.

Trzymając strzykawkę pod kątem 120 stopni, z końcem tłoka skierowanym w dół, włożyć tłok, uważając, aby nie wprowadzić pęcherzyków powietrza między zawiesinę a końcówkę tłoka. Przymocować zespół uszczelki do igły do pipety i przymocować igłę do strzykawki. Nacisnąć tłok, aby przesunąć zawiesinę komórek do igły do pipety i podłączyć strzykawkę do stereotaktycznej pompy strzykawkowej.

Przesunąć tłok, aby upewnić się, że zespół pompy strzykawkowej działa prawidłowo, a następnie przesunąć igłę do współrzędnych do wstrzykiwania. Wyrównaj końcówkę igły do bregma i ustaw współrzędne x i y na zero. Przesunąć końcówkę igły nad kraniektomią na dwa milimetry w bok i minus jeden milimetr do tyłu do bregmy i dotknąć końcówką igły do powierzchni opony twardej.

Lekko podnieś igłę, a następnie wykonaj małe nacięcie w oponie twardej w miejscu, w którym igła się zetknęła. Ustaw współrzędną stereotaktyczną na z równa się zero i naciśnij tłok, aby potwierdzić, że zawiesina komórek przepływa odpowiednio przed wprowadzeniem igły do mózgu. Wprowadź igłę do mózgu na głębokość z równa się minus 1,4 milimetra, aby umieścić przeszczep na granicy istoty szarej / białej kory głębokiej.

Uruchomić pompę strzykawkową, aby podawać zawiesinę komórek przez 15 minut. Użyj mikroskopu o dużej odległości roboczej, aby monitorować odpływ zawiesiny komórek, nawadniając miejsce operacji sterylną solą fizjologiczną podczas wstrzyknięcia, aby utrzymać nawodnienie tkanek. Po dostarczeniu wszystkich komórek należy powoli wycofać igłę do przeszczepu i przepłukać miejsce operacji dodatkową solą fizjologiczną przed zamknięciem nacięcia nowymi szwami.

Następnie zapewnij opiekę pooperacyjną, jak pokazano.