JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:25 min • August 29th, 2025
Zacznij od układu mikrostudzienkowego pokrytego warstwą obojętną na jego płaskiej powierzchni.
Dodaj zawiesinę komórek bakteryjnych do macierzy, pozwalając im osiedlić się w studzienkach.
Zdejmij powłokę, aby usunąć komórki związane z powierzchnią, zachowując te zlokalizowane w studzienkach.
Następnie zabezpiecz układ mikrostudzienek między przekładkami.
Weź szkiełko z powłoką nieadhezyjną i nałóż na niego roztwór prekursora hydrożelu zawierający syntetyczny polimer i środek sieciujący rozpuszczony w buforze.
Odwróć szkiełko na tablicę i inkubuj. Środek sieciujący reaguje z polimerem, tworząc porowaty hydrożel, który więzi komórki.
Zdjąć szkiełko i umieścić matrycę w podłożu, które wspomaga rozwój bakterii i zawiera antybiotyki zapobiegające zanieczyszczeniu.
Zamknięte bakterie namnażają się w przestrzennie odrębne kolonie.
Hydrożel zawiera fotodegradowalne wiązania krzyżowe, które pękają pod wpływem światła ultrafioletowego, umożliwiając ukierunkowaną degradację hydrożelu w celu selektywnej ekstrakcji kolonii bakteryjnych.
Wysiewaj 700 mikrolitrów zawiesin komórek bakteryjnych z OD 600 0,1 na podłożu z matrycy mikrostudzienek i przygotuj roztwór prekursora hydrożelu, jak wykazano wcześniej, używając 12,5 mikrolitrów buforowanego fosforanem soli fizjologicznej ATGN o pH osiem. Pobrać pipetę 12,5 mikrolitra roztworu prekursora na niereaktywnym szkiełku ze szkła perfluoroalkilowego i umieścić dwie stalowe przekładki o grubości 38 mikrometrów po dwóch przeciwnych stronach podłoża układu mikrostudzienek zaszczepionego komórkami. Następnie odwróć szkiełko perfluoroalkilowane kropelką roztworu prekursora i umieść kroplę na środku podłoża mikrostudzienki.
Gdy hydrożel utworzy się po 25-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej, delikatnie wyjmij szkiełko z podłoża mikrostudzienki i umieść substrat na szalce Petriego zawierającej pożywkę ATGN uzupełnioną antybiotykiem.