JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:30 min. • August 29th, 2025
Rozpocząć od płytki wielodołkowej zawierającej wstępnie poddane działaniu makrofagów poddanych działaniu pęcherzyków błony zewnętrznej bakterii Legionella pneumophila lub OMV.
Dodać Legionella pneumophila w określonym stosunku bakterii do komórek gospodarza, aby zainfekować makrofagi leczone OMV.
Podczas inkubacji makrofagi internalizują bakterie w fagosomach związanych z błoną.
Wstępne leczenie OMV zmienia sygnalizację makrofagów, hamując dojrzewanie fagosomów.
Ułatwia to tworzenie wakuoli zawierającej Legionellę, która chroni bakterie i umożliwia replikację wewnątrzkomórkową.
Dodaj detergent i inkubuj w celu lizy makrofagów. To uwalnia bakterie wewnątrzkomórkowe do pożywki.
Rozcieńczony lizat rozprowadzić na wzbogaconej w składniki odżywcze płytce agarowej.
Podczas inkubacji bakterie rosną i tworzą widoczne kolonie.
Policz kolonie, aby określić jednostki tworzące kolonie lub CFU, reprezentujące liczbę żywotnych bakterii.
Porównaj liczbę CFU między makrofagami leczonymi i nieleczonymi OMV.
Wyższy CFU u makrofagów leczonych OMV w porównaniu z makrofagami nieleczonymi wskazuje, że OMV ułatwiają przeżycie Legionelli w makrofagach.
Zakażenie wstępnie poddanych lub nieleczonych komórek THP-1 dzik
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych