JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:12 min. • August 29th, 2025
Weźmy posiew Staphylococcus aureus, bakterii o grubej ścianie komórkowej peptydoglikanu.
Rozcieńczyć kulturę w świeżych pożywkach zawierających antybiotyki i inkubować ją w ciepłej temperaturze z potrząsaniem, aby pobudzić wzrost bakterii.
Przenieś kulturę do probówki i odwiruj ją, aby osadzać bakterie.
Wyrzuć supernatant i umieść osad na lodzie, aby chronić bakterie przed uszkodzeniem.
Zawiesić osad w buforze do lizy i przenieść go do probówki zawierającej kulki krzemionkowe.
Włóż probówkę do mechanicznego przyrządu do lizy komórek i rozpocznij mieszanie.
Gwałtowne zderzenia bakterii z kulkami generują siły ścinające. To powoduje lizę bakterii, uwalniając kompleksy DNA, RNA i RNA-białko.
Jony w buforze do lizy stabilizują struktury RNA, podczas gdy czynniki redukujące w buforze dezaktywują enzymy rozkładające RNA.
Teraz ponownie odwiruj mieszaninę, aby osadzać resztki.
Zebrać supernatant zawierający kwasy nukleinowe i białka do dalszej analizy.
Wyhoduj jedną kolonię szczepów przenoszących plazmidy pCN51 P3 MS2 sRNA lub pCN51 P3 MS2 w trzech mililitrach pożywki BHI uzupełnionej 10 mikrogramami erytromycyny na mikrolitr w duplikatach.
Rozcieńczyć każdą nocną hodowlę w 50 mililitrach świeżej po
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych