JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:25 min. • August 29th, 2025
Zacznij od chorobotwórczych szczepów bakteryjnych hodowanych na oddzielnych płytkach agarowych.
Każdy szczep niesie ze sobą różne mutacje w genach odpowiedzialnych za wytwarzanie kapsułki, ochronnej warstwy polisacharydowej.
Przenieść pojedyncze kolonie z płytek do oddzielnych probówek zawierających płynną pożywkę bogatą w składniki odżywcze i inkubować.
Podczas inkubacji bakterie wchodzą w fazę wzrostu wykładniczego i wyrażają geny wytwarzające kapsułki.
Mutacje w tych genach powodują zmiany w produkcji kapsułek, generując komórki nieotoczkowane, słabo otoczkowane i silnie otoczkowane.
Przenieś kultury i odwiruj, aby osadzać komórki.
Niekapsułkowane i słabo otoczkowane komórki tworzą gęste granulki, podczas gdy mocno kapsułkowane komórki,
ze względu na uwodnioną warstwę kapsułki, tworzą mniej gęste granulki.
Ostrożnie usunąć supernatant, aby uniknąć utraty mocno otoczkowanych komórek.
Dodać bufor, ponownie odwirować i wyrzucić supernatant w celu wyeliminowania pozostałej pożywki.
Ponownie zawiesić komórki w buforze, aby ustabilizować bakterie bez promowania dalszego wzrostu, zachowując w ten sposób strukturę kapsułki.
Wybierz pojedynczą kolonię z talerza podstawowego ze sterylną pętlą i zaszczepij 10 mililitrów odpowiedniego bulionu.
Inkubuj kulturę przez noc. Następnie przenieś kulturę do 15-mililitrowej probówki i odwiruj. Następnie wyrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w dwóch mililitrach PBS.
Powtórzyć wirowanie i odrzucić powstały supernatant. Następnie ponownie zawiesić osad w dwóch mililitrach PBS.