JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:37 min. • August 29th, 2025
Weźmy kolonie bakteryjne przekształcone plazmidem zawierającym indukowalny gen.
Wybierz pojedynczą kolonię, aby zaszczepić świeżą płynną pożywkę.
Inkubować z wytrząsaniem w celu natlenienia i jednorodnego wzrostu bakterii.
Użyj rozcieńczonej próbki hodowli, aby zmierzyć absorbancję i oszacować gęstość komórek.
Weź czarną płytkę studzienkową ze szklanym dnem, aby zapobiec przesłuchom światła między próbkami, zapewniając dokładną ocenę ilościową luminescencji.
Dodaj kulturę bakteryjną o pożądanym stężeniu komórek do studzienek.
Dodaj antybiotyk, aby utrzymać retencję plazmidu.
Dodaj induktor, aby zainicjować ekspresję genów.
Gen koduje enzym, który reaguje ze specyficznym białkiem bakteryjnym w celu wytworzenia światła, nadając bakteriom właściwości bioluminescencyjne
.Umieść pokrywkę na płytce, aby zapobiec parowaniu, przed umieszczeniem jej w czytniku płytek o kontrolowanej temperaturze z ciągłym trybem potrząsania.
W regularnych odstępach czasu rejestruj absorbancję, aby zmierzyć liczbę komórek i natężenie światła, aby monitorować bioluminescencję. Skoreluj gęstość komórek z bioluminescencją.
Zaszczepić 3 mililitry pożywki pojedynczą kolonią z płytki nocnej i inkubować komórki w temperaturze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych