Hodowla bakterii Magnetospirillum i ocena ich zachowania magnetotaktycznego

Magnetospirillum to ruchliwe bakterie, które rozwijają się w warunkach niskiego poziomu tlenu.

Wytwarzają magnetyczne nanokryształy, które działają jak dipole magnetyczne, pomagając im poruszać się po polu geomagnetycznym w kierunku optymalnego stężenia tlenu.

Aby wyhodować Magnetospirillum, weź płynne pożywki beztlenowe. Wstrzyknij kontrolowaną objętość tlenu, aby ustalić warunki mikrotlenowe, dodaj bakterie i inkubuj.

Z biegiem czasu zmętnienie wzrasta, co wskazuje na rozwój bakterii.

Aby przygotować kulturę półstałą, należy użyć pożywki zawierającej różowy wskaźnik tlenu, który staje się bezbarwny w strefie o niskiej zawartości tlenu, oznaczając granicę faz tlenowo-tlenowej (OAI) o optymalnym

stężeniu tlenu.

Zaszczepić bakterie w OAI, uszczelnić probówkę i inkubować.

Bakterie namnażają się, tworząc pasmo, które migruje w górę w miarę zużywania tlenu.

Aby ocenić zachowanie magnetotaktyczne, przygotuj wiszącą kroplę hodowanych bakterii i umieść w jej pobliżu magnes.

Pod mikroskopem obserwuj kierunkowe pływanie w kierunku magnesu i odwrócenie ruchu, gdy magnes jest odwrócony.

Aby zaszczepić szczepy MSR-1, AMB-1 i MS-1 w ciekłym pożywce, należy podpalić górne części butelek z tlenem i świeżą pożywką, nakładając etanol na korki i przepuszczając je przez płomień palnika Bunsena.

Za pomocą sterylnej strzykawki i igły pobrać jeden mililitr tlenu z butli tlenowej i przenieść go do butelki ze świeżą pożywką. Jeśli używasz inokulum z innej kultury wyhodowanej w szklanej butelce, podpal obie butelki. Następnie zaszczepij jeden mililitr starszej kultury w świeżej pożywce.

Inkubuj kulturę w temperaturze 32 stopni Celsjusza i zaszczep ją na świeże podłoże po czterech do siedmiu dniach. Aby zaszczepić MSR-1 w gradientowym tlenie, półstałym podłożu, sprawdź, czy probówka ze świeżą pożywką wykazuje dobrze zdefiniowany OAI, zmaterializowany przez różowy do bezbarwnego interfejs około jednego do trzech centymetrów poniżej powierzchni pożywki. Jeśli inokulum pochodzi z innej półstałej hodowli o gradiencie stężenia tlenu, należy zebrać bakterie, zasysając 50 mikrolitrów kultury za pomocą sterylnej końcówki pipety umieszczonej na opasce utworzonej przez bakterie.

Powoli zaszczepiaj te bakterie w OAI w świeżej pożywce, unikając zakłócenia interfejsu. Zamknij probówkę i pozwól bakteriom rosnąć w temperaturze od 25 stopni Celsjusza do 30 stopni Celsjusza. Aby upewnić się, że bakterie są zarówno magnetyczne, jak i modalne, umieść kroplę kultury na szkiełku nakrywkowym mikroskopu.

Odwróć szkiełko nakrywkowe i zainstaluj je na pierścieniu uszczelniającym o przekroju okrągłym spoczywającym na szklanym szkiełku. Upewnij się, że kropla nie dotyka dolnego szkiełka. Umieść wiszącą kroplę pod mikroskopem i skup się na krawędzi kropli.

Umieść południowy biegun magnesu blisko tej krawędzi i obserwuj, jak bakterie płyną w kierunku krawędzi. Odwróć magnes, aby popłynęły w przeciwnym kierunku.