Izolacja pęcherzyków zewnątrzkomórkowych zawierających syderofory z Mycobacterium tuberculosis

0 wyświetleń3:46 min • September 26th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weźmy hodowlę Mycobacterium tuberculosis wyhodowaną w pożywce ograniczającej żelazo, aby zwiększyć wydzielanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych zawierających siderofory, chelator żelaza.

Wirówka do granulowania bakterii.

Zebrać supernatant i przefiltrować go, aby usunąć resztki bakterii.

Przenieś filtrat do mieszanego systemu ultrafiltracji i przefiltruj w celu usunięcia nadmiaru pożywki i skoncentrowania EV.

Odwirować koncentrat w celu osadzenia resztek komórkowych.

Przenieść supernatant do probówki ultrawirówkowej i odwirować w celu zebrania granulatu EV.

Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad w buforze i wymieszać go ze stężonym podłożem o gradiencie gęstości, aby utworzyć dolną warstwę.

Nałożenie ze zmniejszającymi się stężeniami ośrodka gradientowego w celu utworzenia nieciągłego gradientu gęstości.

Dodaj bufor na górze i odwiruj. Pojazdy elektryczne migrują do warstwy, która odpowiada ich gęstości wyporu.

Zbierz każdą frakcję w osobnej probówce.

Oczyszczona frakcja z EV zawierającymi syderofory jest gotowa do dalszych badań.

Przenieś kulturę do pięciu stożkowych probówek wirówek o pojemności 225 mililitrów i odwiruj przy 2,850 razy g przez siedem minut w temperaturze 20 stopni Celsjusza. Zebrać supernatant kultury za pomocą pipety o pojemności 50 mililitrów i przefiltrować, wysterylizować przez filtr 0,22 mikrona.

Aby wyizolować MEV, należy przenieść filtrat hodowlany do systemu ultrafiltracji z mieszanymi komórkami umieszczonego w temperaturze czterech stopni Celsjusza i przefiltrować koncentrat pod ciśnieniem mniejszym niż 50 PSI przez membranę odcinającą o mocy 100 kilodaltonów. Następnie odwirować skoncentrowany filtrat kulturowy pod ciśnieniem 15 000 razy g przez 15 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza i zebrać supernatant w probówkach do ultrawirowania poliwęglanu. Odwirować supernatant w temperaturze 100 000 g przez dwie godziny w temperaturze czterech stopni Celsjusza.

Następnie usunąć supernatant i ponownie zawiesić błoniaste granulki w sumie w jednym mililitrze sterylnego PBS przez delikatne pipetowanie. Wymieszaj 0,5 mililitra zawiesiny granulek z 1,5 mililitra 60% roztworu jodiksanolu na dnie cienkościennej probówki ultrawirówki z polipropylenu. Nałóż tę zawiesinę MEV jodixanol 45% na jeden mililitr roztworów 40%, 35%, 30%, 25% i 20% jodiksanolu oraz jeden mililitr PBS na górze.

Wirować z prędkością 100 000 g przez 18 godzin w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Następnie użyj jednomililitrowej strzykawki Hamiltona, aby zebrać jednomililitrowe frakcje gradientu gęstości, zaczynając od góry. Rozcieńczyć każdą zebraną frakcję do 20 mililitrów PBS i odwirować z prędkością 100 000 razy g przez dwie godziny w temperaturze czterech stopni Celsjusza.

Usunąć supernatant i ponownie zawiesić w 0,5 mililitra PBS.

07:15

Oczyszczanie wysokowydajnych preparatów pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z wirusa

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:46

Chromatografia wykluczająca wielkość do oddzielania pęcherzyków zewnątrzkomórkowych od kondycjonowanych pożywek do hodowli komórkowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:34

Identyfikacja peptydów małych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:06

Hodowla prątków gruźlicy w warunkach ograniczonych żelazem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:37

Isolation of Phagosomes Containing Magnetic Bead-Tagged Bacteria from Infected Macrophages

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:49

Zagęszczenie białka filtratu kultur bakteryjnych za pomocą urządzenia do ultrafiltracji

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:38

Technika chromatografii wykluczającej wielkość do oczyszczania pęcherzyków zewnątrzkomórkowych prątków

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:33

Izolacja fagosomów zawierających Salmonella typhimurium od makrofagów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:27

Izolacja i charakterystyka pęcherzyków zewnątrzkomórkowych wytwarzanych przez prątki o ograniczonej zawartości żelaza

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:29

Mycobacterium tuberculosis (prątki gruźlicy) Wzbogacanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych za pomocą chromatografii wykluczania wielkości

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026