JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:46 min. • September 26th, 2025
Weźmy hodowlę Mycobacterium tuberculosis wyhodowaną w pożywce ograniczającej żelazo, aby zwiększyć wydzielanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych zawierających siderofory, chelator żelaza.
Wirówka do granulowania bakterii.
Zebrać supernatant i przefiltrować go, aby usunąć resztki bakterii.
Przenieś filtrat do mieszanego systemu ultrafiltracji i przefiltruj w celu usunięcia nadmiaru pożywki i skoncentrowania EV.
Odwirować koncentrat w celu osadzenia resztek komórkowych.
Przenieść supernatant do probówki ultrawirówkowej i odwirować w celu zebrania granulatu EV.
Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad w buforze i wymieszać go ze stężonym podłożem o gradiencie gęstości, aby utworzyć dolną warstwę.
Nałożenie ze zmniejszającymi się stężeniami ośrodka gradientowego w celu utworzenia nieciągłego gradientu gęstości.
Dodaj bufor na górze i odwiruj. Pojazdy elektryczne migrują do warstwy, która odpowiada ich gęstości wyporu.
Zbierz każdą frakcję w osobnej probówce.
Oczyszczona frakcja z EV zawierającymi syderofory jest gotowa do dalszych badań.
Przenieś kulturę do pięciu stożkowych probówek wirówek o pojemności 225 mililitrów i odwiruj przy 2,850 razy g przez siedem minut w temperaturze 20 stopni Cels
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych