Izolacja i wzbogacanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych pochodzących z błony zewnętrznej od bakterii
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:53 min. • September 26th, 2025
Zacznij od zaszczepienia kolonii genetycznie zmodyfikowanych bakterii w płynnym pożywce.
Bakterie te wyrażają fluorescencyjne białko fuzyjne w błonie zewnętrznej, zewnętrznej warstwie ochronnej.
Inkubuj, aby bakterie uwolniły pęcherzyki zewnątrzkomórkowe (EV), nanostruktury związane z błoną biorące udział w komunikacji międzykomórkowej, które zawierają białko fluorescencyjne.
Przenieś kulturę do butelki i odwiruj z niską prędkością, aby osadzać komórki.
Przenieś supernatant zawierający EV, białka komórkowe i szczątki komórkowe. Odwirować z dużą prędkością i usunąć supernatant zawierający zanieczyszczenia.
Przefiltrować supernatant przez membranę, aby wyeliminować wszelkie pozostałe bakterie i zanieczyszczenia.
Zaszczepić próbkę na agarze i inkubować ją. Brak tworzenia kolonii bakteryjnych potwierdza brak bakterii.
Przenieś roztwór do urządzenia ultrafiltracyjnego z półprzepuszczalną membraną i odwiruj, aby wychwycić EV, jednocześnie eliminując mniejsze białka.
Zbierz skoncentrowane EV w probówce do dalszej analizy.
Zacznij od zaszczepienia pojedynczych kolonii Escherichia coli w 250 do 1000 mililitrach bulionu Luria-Bertani lub LB, używając sterylnej pętli. Następnie inkubuj kulturę tlenowo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych