Izolacja bakteryjnych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych za pomocą chromatografii wykluczającej wielkość

Weź chromatografię wykluczania wielkości lub kolumnę SEC wypełnioną porowatymi kulkami żywicy o określonym rozmiarze. Na górze znajduje się zbiornik na próbki.

Dodać sól fizjologiczną buforowaną fosforanami lub PBS w celu zrównoważenia kulek kolumny i odrzucić przepływ.

Załaduj skoncentrowany filtrat kultur bakteryjnych, który zawiera pęcherzyki zewnątrzkomórkowe lub EV, wydzielane białka i zanieczyszczenia.

EV to nanopęcherzyki na bazie lipidów, które przenoszą bioaktywne cząsteczki i są wydzielane przez bakterie.

Gdy filtrat dostanie się do kulek, dodaj PBS, aby przepuścić go przez złoże żywicy.

Odrzucić początkowy eluat zawierający duże zanieczyszczenia niepęcherzykowe.

Umieść probówkę zbiorczą pod wylotem i sekwencyjnie dodawaj PBS.

Duże EV unikają mniejszych porów żywicy, przemieszczają się przez przestrzenie międzycząsteczkowe między kulkami i najpierw eluują.

Mniejsze białka i zanieczyszczenia dostają się do porów, podążają dłuższymi ścieżkami i wymywają się później.

Zbierz wcześnie eluujące frakcje zawierające EV i przechowuj je do analizy.

W celu wyizolowania EV należy przeprowadzić chromatografię wykluczania wielkości lub SEC, używając małej kolumny z 10-mililitrową objętością złoż