Transinfekcja bakteryjna limfocytów T in vitro poprzez tworzenie synaps immunologicznych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:05 min. • September 26th, 2025
Zacznij od studzienek zawierających limfocyty T CD4 + eksprymujące receptory specyficzne dla peptydu owoalbuminy lub OVAp.
W studzience kontroli ujemnej umieść porowatą wkładkę membranową.
W probówce weź komórki dendrytyczne zakażone bakteriami i załadowane OVAp w celu prezentacji powierzchniowej.
Dodać komórki dendrytyczne bezpośrednio do studzienki testowej i do wkładki w studzience kontroli ujemnej.
Dodaj pożywkę do studzienek i inkubuj.
W dołku testowym komórki oddziałują na siebie, tworząc synapsę immunologiczną, ułatwiając przenoszenie bakterii z komórki dendrytycznej do komórki T, proces znany jako transinfekcja.
W studzience kontroli ujemnej bariera błonowa zapobiega interakcji komórka-komórka, hamując w ten sposób transinfekcję.
Dodaj antybiotyk gentamycynę do studzienek i inkubuj.
Gentamycyna nie może przenikać do komórek eukariotycznych, zabijając w ten sposób tylko bakterie niezinternalizowane, podczas gdy bakterie zinternalizowane przeżywają.
Próbka testowa zawierająca zakażone limfocyty T oraz próbka kontrolna z niezakażonymi limfocytami T są teraz gotowe do izolacji limfocytów T i ilościowego określenia transinfekcji.
Do 24-dołkowej płytki hodowlanej dodaj dwa miliony limfocyt
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych