JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:48 min. • September 26th, 2025
Weźmy kuwetę zawierającą roztwór roboczy tioflawiny T, barwnika fluorescencyjnego specyficznego dla amyloidu, rozpuszczonego w roztworze soli fizjologicznej buforowanej fosforanami.
Umieść kuwetę w spektrofluorometrze i zarejestruj podstawowy sygnał fluorescencji.
Wstrzymaj skanowanie i wyjmij kuwetę.
Dodać wysterylizowany filtrem supernatant hodowlany pobrany z komórek śródbłonka płuc zakażonych zjadliwymi bakteriami Pseudomonas .
Supernatant zawiera agregaty amyloidowe, które są nieprawidłowo sfałdowanymi, bogatymi w arkusze beta białkami.
Delikatnie wymieszaj zawartość przez odwrócenie, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie.
Ponownie załaduj kuwetę do spektrofluorometru i wznów skanowanie, aby uzyskać sygnał fluorescencyjny oparty na czasie.
Tioflawina T wiąże się specyficznie z amyloidami bogatymi w arkusze beta, co prowadzi do zwiększonej fluorescencji.
Wykonaj skan fluorescencyjny przy użyciu tych samych ustawień.
Wzrost fluorescencji w stosunku do wartości wyjściowej wskazuje na obecność i względną obfitość amyloidów wywołanych infekcją w supernatancie hodowli.
Aby określić ilościowo zawartość amyloidów w supernatancie, dodaj 20 mikrolitrów świeżo przygotowanego i przefiltrowanego 5
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych