Fluorescencyjne obrazowanie poklatkowe cyklu życiowego Streptomyces venezuelae

Weź płytkę mikroprzepływową ze studzienką zawierającą zarodniki Streptomyces venezuelae, bakterii tworzącej strzępki.

Inne wyznaczone studnie zawierają albo bogate w składniki odżywcze, albo zużyte podłoże.

Zarodniki pochodzą ze szczepu eksprymującego fluorescencyjne białka DivIVA i FtsZ, które lokalizują się odpowiednio na końcach strzępek i ściankach poprzecznych.

Nałóż olejek immersyjny na soczewkę obiektywu odwróconego mikroskopu i na okienko obrazowania płytki.

Zamontuj płytkę na stoliku mikroskopu i rozpocznij obrazowanie poklatkowe.

Załaduj zarodniki do komory hodowlanej na płytce.

Następnie wprowadź pożywkę bogatą w składniki odżywcze, aby zainicjować kiełkowanie zarodników.

W miarę wzrostu strzępek DivIVA gromadzi się na końcach strzępek, podczas gdy FtsZ tworzy rozproszone pierścienie na ścianach poprzecznych.

Następnie przełącz się na zużyte medium. Brak składników odżywczych w tej pożywce wspomaga zarodnikowanie.

W kiełkujących strzępkach ogniska DivIVA znikają, a FtsZ reorganizuje się w regularną drabinę pierścieni podziałowych, tworząc przegrody zarodnikowe.

Z biegiem czasu zanik fluorescencji FtsZ w tych samych strzępkach potwierdza zakończenie zarodnikowania.

Wcześniej podgrze