JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:47 min • September 26th, 2025
Weź płytkę agarową roju, która wspiera ruchliwość roju - skoordynowany ruch bakterii po półstałej powierzchni, który tworzy wzory przypominające wąsy.
Zaszczepić środek płytki kulturą Pseudomonas aeruginosa i umieścić mieszaninę tej samej kultury z antybiotykiem w równomiernie rozmieszczonych pozycjach satelitarnych.
Przykryj talerz pomalowaną na czarno pokrywką, aby zminimalizować odbicia światła.
Umieść płytkę na skanerze płaskim w inkubatorze utrzymywanym w optymalnej wilgotności.
Podczas inkubacji centralna populacja zaczyna się rozmnażać i roić.
Gdy rój zbliża się do kolonii traktowanych antybiotykami, wykrywa sygnały stresu wydzielane przez bakterie i przekierowuje, aby uniknąć tych regionów.
Skaner, sterowany przez zautomatyzowane oprogramowanie, rejestruje obrazy o wysokiej rozdzielczości w regularnych odstępach czasu.
Skompiluj te obrazy w film, aby zwizualizować postęp roju i unikanie go w czasie.
Określ ilościowo unikanie roju, mierząc odległość od każdej kolonii satelitarnej do krawędzi centralnego roju na obrazie z późnego etapu.
Po umieszczeniu klisz w skanerze otwórz file i zapisz ustawienia, aby ustawić ścieżkę zapisu dla obrazów i kliknij skanuj i OK w odstępach 30-minutowych. Aby zautomatyzować pobieranie obrazów, użyj oprogramowania do tworzenia skryptów.
Wybierz zarówno skanowanie w trybie bezczynności, jak i skanowanie pojedyncze, a następnie kliknij prawym przyciskiem myszy skanowanie w trybie bezczynności, a następnie kliknij lewym przyciskiem myszy włączone. Pod koniec inkubacji zaimportuj wszystkie zeskanowane obrazy do ImageJ. W oknie opcji sekwencji liczba obrazów będzie wskazywać liczbę wybranych obrazów.
Rozpocznij obraz od jednego, aby rozpocząć od pierwszego obrazu w folderze i skaluj obrazy do 100%, aby zachować oryginalny rozmiar obrazów. Kliknij opcję Konwertuj na RGB, aby zachować kolory obrazów. Pozostaw opcję Użyj wirtualnego stosu niezaznaczoną i kliknij OK, aby załadować obrazy.
Kliknij file, save as i AVI, aby scalić obrazy w plik AVI. Dostosuj kompresję do JPEG, a liczbę klatek na sekundę do pięciu klatek na sekundę. Następnie zapisz film poklatkowy AVI w odpowiednim folderze przechowywania.