JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:20 min. • September 26th, 2025
Zacznij od eksperymentalnej rośliny z genetycznie zmodyfikowanymi regionami liści wykazującymi ekspresję dużych niefluorescencyjnych fragmentów superfoldera białka zielonej fluorescencji lub sfGFP.
Wstrzyknąć te zmodyfikowane obszary za pomocą bakterii Pseudomonas zawierających białka efektorowe oznaczone małym niefluorescencyjnym fragmentem sfGFP.
Inkubuj, aby umożliwić interakcję między bakteriami a komórkami liści.
Korzystając ze specjalistycznego systemu wydzielania, Pseudomonas dostarcza oznakowane białka efektorowe do cytozolu liścia.
Bliskość między dużymi i małymi fragmentami GFP umożliwia ich składanie się w funkcjonalny fluorescencyjny sfGFP, który następnie przemieszcza się do błony plazmatycznej.
Po inkubacji należy wyciąć krążki liściowe z wstrzykniętych obszarów.
Wizualizuj te dyski za pomocą laserowego skaningowego mikroskopu konfokalnego.
Początkowo zobrazuj dysk liścia przy niskiej intensywności lasera, aby zminimalizować autofluorescencję. Następnie zwiększ moc lasera, aby poprawić widoczność.
Zielona fluorescencja potwierdza udaną infekcję bakteryjną i dostarczenie białka efektorowego do komórek roślinnych.
W przypadku liści Nicotiana benthamiana należy naciekać zawiesinę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych