$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Weź szkiełko nakrywkowe z fotodegradowalną warstwą hydrożelu, która zawiera uwięzione kolonie bakterii, genetycznie zmodyfikowane w celu emitowania fluorescencji.
Umieść szkiełko nakrywkowe w uchwycie.
Dodaj pożywkę, aby zapobiec odwodnieniu próbki.
Pod mikroskopem jasnego pola skup się na pojedynczej interesującej nas kolonii.
Korzystając z odpowiedniego oprogramowania, zaprojektuj wzór świetlny do ekstrakcji komórek na obrzeżach kolonii, aby rozbić wiązania strukturalne hydrożelu i zminimalizować ekspozycję komórek na promieniowanie UV.
Dostosuj natężenie światła UV i czas ekspozycji.
Zainicjuj ekspozycję na światło UV, aby zerwać wiązania strukturalne w hydrożelu w odsłoniętych obszarach, które ułatwiają uwalnianie docelowej kolonii.
Za pomocą filtra fluorescencyjnego zidentyfikuj kolonię.
Umieść końcówkę rurki w tym miejscu, tak aby drugi koniec był podłączony do strzykawki.
Przełącz się w tryb jasnego pola i za pomocą strzykawki odessaj uwolnioną kolonię.
Przenieś kolonię do probówki w celu dalszej analizy.
Umieść próbkę w uchwycie PDMS i dodaj zdefiniowane podłoże na próbce, aby zapobiec odwodnieniu próbki i zapewnić roztwór nośnikowy dla uwolnionych komórek. Po ustawieniu lustra kalibracyjnego na miejscu, wyreguluj ostrość mikroskopu, aby uzyskać ostry obraz kolonii w układzie hydrożelu lub mikrostudzienki i sprawdź, aby zidentyfikować kolonie lub studzienki będące przedmiotem zainteresowania.
Tutaj zaprojektuj wzory świetlne, podczas gdy widok kamery pokazuje kolonie wewnątrz próbki, aby przetestować różne wzorce ekstrakcji komórek i zapisać zdefiniowany wzór. Następnie wybierz sekcję kontroli sesji, dodaj zapisaną sekwencję w zakładce zatytułowanej nazwą produktu narzędzia do wzorzystego oświetlenia. Wybierz opcję stymulowania wzoru do wyświetlenia i dostosuj żądane położenie ekspozycji.
Następnie dostosuj natężenie światła do 60%, a czas ekspozycji do 40 sekund pod zakładką sterowania LED i rozpocznij proces ekspozycji. Monitoruj degradację hydrożelu w czasie rzeczywistym i w trybie Brightfield, aby zapewnić uwolnienie ogniw. Aby zebrać uwolnioną komórkę, zmień filtr mikroskopu z Brightfield na TRITC, aby uwidocznić odsłonięty obszar próbki gołym okiem.
Po zlokalizowaniu odsłoniętego obszaru umieść koniec rurki na napromieniowanym miejscu, a następnie zmień filtr mikroskopu z powrotem na Brightfield, aby monitorować pobieranie komórek w czasie rzeczywistym. Za pomocą strzykawki przymocowanej do drugiego końca rurki ostrożnie pobrać 200 mikrolitrów roztworu zawierającego uwolnione komórki i przenieść roztwór do 1,5-milimetrowej probówki wirówkowej w celu analizy DNA lub posiewu