Ilościowe oznaczanie alginianu bakteryjnego za pomocą testu immunoenzymatycznego opartego na przeciwciałach
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:20 min. • September 26th, 2025
Pobrać mikropłytkę z próbką zawierającą alginian, ochronny egzopolisacharyd wytwarzany przez bakterię Pseudomonas aeruginosa.
Przygotować seryjne rozcieńczenie wzorca pochodzącego z alginianu w celu ilościowego określenia stężenia alginianów w próbce.
Dodaj bufor powlekający i inkubuj, aby ułatwić przyleganie cząsteczek do powierzchni studzienki.
Umyć, aby usunąć niezwiązane cząsteczki.
Inkubować ze środkiem blokującym w celu zamaskowania niespecyficznych miejsc wiązania.
Przemyć, a następnie inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami specyficznymi dla alginianu.
Umyj ponownie, a następnie inkubuj z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z enzymami, które są skierowane do przeciwciał pierwszorzędowych.
Przemyć, a następnie inkubować z podłożem chromogenicznym, które enzym utlenia w celu wytworzenia kolorowego produktu.
Dodaj kwaśny roztwór, który zatrzymuje reakcję i wzmacnia kolor, aby umożliwić wykrywanie kolorymetryczne.
Za pomocą czytnika mikropłytek zmierz intensywność koloru.
Utworzyć krzywą wzorcową z intensywności rozcieńczeń wzorcowych i wykreślić intensywność próbki, aby określić stężenie alginianów.
Za pomocą mikropipety dodać 50 mikrolitrów pobranej próbki do niepoddanej dzia
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych