Izolacja i hodowla bakterii Clostridioides difficile z jelita larwalnego danio pręgowanego

Zacznij od uśpionej larwy danio pręgowanego z jelitem zakażonym przez Clostridioides difficile, patogenną bakterię beztlenową.

Zabezpiecz górny grzbietowy pień larwy i usuń jej głowę, aby odsłonić narządy wewnętrzne.

Zabezpiecz środkowy grzbiet pnia i delikatnie odizoluj jelito od jamy ciała.

Przenieść wyizolowane jelito do probówki mikrowirówkowej zawierającej bufor.

Homogenizuj jelito za pomocą tłuczka, aby rozbić tkankę i uwolnić drobnoustroje jelitowe.

Przenieść homogenat do probówki zawierającej selektywne podłoże hodowlane uzupełnione antybiotykami.

Inkubować homogenat w komorze beztlenowej.

Warunki beztlenowe hamują rozwój bakterii tlenowych, podczas gdy antybiotyki są ukierunkowane na rozwój natywnych beztlenowych drobnoustrojów jelitowych i hamują ich wzrost.

Clostridioides difficile jest odporny na te antybiotyki i namnaża się w warunkach beztlenowych.

Składniki odżywcze i czynniki wzrostu w pożywce hodowlanej dodatkowo sprzyjają podziałowi komórek, umożliwiając wzrost żywotnych Clostridioides difficile.

Po eutanazji zakażonych larw danio pręgowanego wbij igłę w grzbietowy pień larw danio pręgowanego w pobliżu głowy, aby unieruchomić danio pręgowanego. Usuń głowę za skrzelami za po