JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:49 min • September 26th, 2025
Umieść wysterylizowane, pokryte agarozą szkiełko mikromacierzy z wieloma plamkami polimerowymi na płytce wielodołkowej. Agaroza minimalizuje niespecyficzne wiązanie bakteryjne.
Dodać mieszaną kulturę bakterii do szkiełka i inkubować ją, delikatnie mieszając.
Bakterie wydzielają wyraźne białka adhezyjne, które wiążą się z korzystnymi plamkami polimerowymi, co z czasem powoduje silniejsze przyczepienie się bakterii i kolonizację.
I odwrotnie, polimery odstraszające są odporne na adsorpcję białek i zmniejszają przyczepianie się bakterii.
Przepłukać szkiełko solą fizjologiczną buforowaną fosforanami lub PBS w celu usunięcia luźno związanych bakterii.
Dodaj DAPI, aby wybarwić DNA bakterii przyczepionych do powierzchni.
Umyj szkiełko PBS, osusz je i uszczelnij samoprzylepnym szkiełkiem nakrywkowym.
Wysterylizuj zewnętrzną powierzchnię szkiełka etanolem.
Uchwyć obrazy w jasnym polu, aby zlokalizować plamki polimerowe. Następnie przełącz się w tryb fluorescencji, aby wykryć fluorescencję na plamkach polimerowych.
Plamki polimerowe, które wykazują zmniejszoną fluorescencję, wskazują na minimalne przyczepienie bakterii i są identyfikowane jako polimery odstraszające bakterie.
Po wyhodowaniu i przygotowaniu inokulantów do mikromacierzy, zgodnie z protokołem tekstowym, umieść wysterylizowane promieniami UV mikromatryce polimerowe na prostokątnych płytkach czterodołkowych i dodaj sześć mililitrów mieszanych kultur bakteryjnych. Inkubować płytki w temperaturze 37 stopni Celsjusza z delikatnym mieszaniem przez pięć dni. Po inkubacji użyj PBS, aby delikatnie przepłukać mikromacierze dwukrotnie.
Następnie dodaj jeden mikrogram na mililitr DAPI w PBS i inkubuj przez 30 minut. Następnie przenieś mikromacierze na świeżą płytkę czterodołkową, przykryj mikromacierze PBS, a następnie delikatnie zawiruj. Następnie wymień PBS raz i powtórz pranie.
Po wypłukaniu wysuszyć mikromacierze pod strumieniem powietrza, a następnie nałożyć folię uszczelniającą i przymocować szkiełka szklane do szkiełek do szkiełek do mikromacierzy. Gdy klej wyschnie, użyj 70% etanolu do sterylizacji zewnętrznej powierzchni. Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego, wyposażonego w 20-krotny obiektyw, uchwyć pojedyncze obrazy dla każdej plamki polimerowej w jasnym polu i kanałach DAPI.