Izolacja bakterii opornych na antybiotyki z próbki wody do analizy molekularnej

Zacznij od próbki wody, która zawiera bakterie przenoszone przez wodę i przefiltruj ją, aby usunąć zanieczyszczenia.

Przenieś rozcieńczony filtrat na płytki agarowe o niskiej zawartości składników odżywczych, z których każda jest uzupełniona określonym antybiotykiem. Rozprowadzić filtrat i inkubować.

Bakterie przenoszące specyficzny gen oporności na antybiotyki rozwijają się na odpowiednich płytkach antybiotykowych i tworzą kolonie.

Policz kolonie, aby określić jednostki tworzące kolonie (CFU), reprezentujące liczbę bakterii opornych na antybiotyki.

Wybierz pojedynczą kolonię z każdej płytki i zawieś ją w sterylnej wodzie destylowanej.

Podgrzej zawiesinę, aby zlizować komórki i uwolnić zawartość wewnątrzkomórkową, w tym DNA bakterii, które zawiera gen oporności na antybiotyki.

Odwirować probówki, aby oddzielić zanieczyszczenia i zebrać supernatant zawierający DNA.

Dodaj odczynniki do amplifikacji do wyekstrahowanego DNA.

Umieść probówki w termocyklerze i uruchom program, aby amplifikować określony region bakteryjnego DNA.

Amplifikowane DNA jest gotowe do analizy sekwencji w celu identyfikacji genu oporności na antybiotyki.

Próbkę wody należy przetwarzać w sposób aseptyczny, filtrując ją prze