JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:02 min • September 26th, 2025
Zacznij od probówki zawierającej kulturę bakteryjną zmodyfikowaną genetycznie, aby działała jako bioczujnik.
Bakterie zawierają system plazmidowy z czerwonym białkiem fluorescencyjnym lub genem RFP pod kontrolą promotora. Promotor jest tłumiony przez białko, które jest wrażliwe na obecność określonego analitu, takiego jak ołów.
Użyj chusteczki na bazie etanolu, aby dokładnie wytrzeć badaną powierzchnię i zebrać analit znajdujący się na powierzchni.
Wytnij niewielką część od środka chusteczki i zanurz ją całkowicie w kulturze bakteryjnej.
Inkubować w celu ułatwienia dyfuzji analitu z chusteczki do kultury bakteryjnej.
Analit wnika do bakterii i wiąże się z białkiem represorowym, zmieniając jego konformację i aktywując promotor.
Aktywowany promotor inicjuje transkrypcję genu, prowadzącą do ekspresji RFP.
Zmierz fluorescencję bakteryjną, aby upewnić się, że analit jest obecny na badanej powierzchni.
Użyj chusteczki na bazie etanolu przeznaczonej do usuwania ołowiu, aby wytrzeć wszystkie powierzchnie dłoni, w tym między palcami. Chusteczki należy przechowywać w odpowiednio oznakowanej, zamykanej torebce do czasu analizy. Użyj chusteczki nasączonej alkoholem, aby wytrzeć wszelkie duże powierzchnie, które mają być testowane.
Użyj bawełnianej podstawki zwilżonej etanolem, aby wytrzeć wszelkie małe powierzchnie, które mają być testowane. Zakładając czyste rękawice i używając nożyczek oczyszczonych alkoholem, wytnij odcinek o długości około jednego centymetra kwadratowego od środka chusteczki. Następnie umieść odcięty kawałek chusteczki lub bawełnianego wacika bezpośrednio w probówce hodowlanej zawierającej dwa mililitry bakterii czujnika i upewnij się, że jest całkowicie zanurzony w bulionie.