JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:03 min • September 26th, 2025
Zacznij od kultur dzikich i zmutowanych szczepów Streptomyces coelicolor, nitkowatej bakterii glebowej.
Zmutowane szczepy przenoszą mutacje w genach rozwojowych, które powodują różnice fenotypowe w stosunku do typu dzikiego.
Rozmnażaj kolonie na świeżych płytkach, aby zminimalizować akumulację spontanicznych mutacji wraz z wiekiem.
Umieść pojedyncze kolonie szczepów na oddzielnych obszarach płytki w układzie klinowym, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego
Inkubuj płytkę, aby pobudzić wzrost bakterii.
Szczepy typu dzikiego tworzą włókna powietrzne, które rozwijają się w długie łańcuchy zarodników o szarym zabarwieniu, nadając koloniom rozmyty wygląd.
W przeciwieństwie do tego, zmutowane szczepy albo nie rozwijają włókien powietrznych, co skutkuje łysym wyglądem, albo wytwarzają mniej pigmentowanych zarodników, co powoduje, że włókna powietrzne wydają się białe.
Umieść szalkę Petriego na jednolitym tle, aby zobrazować morfologię kolonii.
Uchwyć obrazy, aby wizualnie porównać różnice fenotypowe między szczepami typu dzikiego i zmutowanym.
Użyj standardowej metody, takiej jak metoda kwadrantowa smugowa pokazana w Saunders 2012, aby smugować szczepy Streptomyces na płytkach agarowych MS i hodować je w pojedynczych koloniach.
Co cztery do sześciu dni zbieraj pojedynczą kolonię i układaj ją ponownie na świeżym talerzu. Wraz z wiekiem kolonie stają się podatne na losowe mutacje. Po przeprowadzeniu mutagenezy zgodnie z protokołem tekstowym należy zwrócić uwagę na morfologię kolonii dla każdego mutanta w porównaniu ze szczepem rodzicielskim typu dzikiego.
Charakteryzując nowe gatunki Streptomyces , porównaj nowy izolat z dobrze zbadanym gatunkiem, zwracając uwagę na podstawowy kształt, powierzchnię kolonii, nieprzezroczystość, wysokość i pigmentację. Oznacz płytkę agarową MS i rozprowadź szczepy typu dzikiego i zmutowanego we wzorach klinowych. Należy uważać, aby żaden szczep nie stykał się z innym szczepem, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
Zanotuj datę i godzinę, kiedy szczepy są rozmazywane na talerzu. Następnie inkubuj płytki w temperaturze 30 stopni Celsjusza. Pamiętaj, że niezwykle ważne jest, aby zawsze chronić próbkę Streptomyces przed zanieczyszczeniem, używać najlepszej sterylnej techniki na wszystkich etapach, otwierając płytki i probówki przez jak najkrótszy czas.
Umieść wyrośnięte szalki Petriego na kolorowym lub białym papierze, aby ujednolicić tło. Napisz na papierze nazwę szczepu, datę, temperaturę inkubacji i czas od pierwszego smugowania płytki.
Zrób cyfrowe zdjęcia płyty z informacjami o naprężeniu zapisanymi na tle papieru, aby zminimalizować zamieszanie.