JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:05 min. • September 26th, 2025
Zacznij od sterylnej probówki zawierającej pożywkę wzrostową specyficzną dla gospodarza. Dodaj wyhodowaną przez noc kulturę bakteryjną gospodarza.
Następnie wprowadź filtrat zawierający Saccharibacteria, pasożytnicze ultramałe bakterie, aby ustanowić kulturę binarną.
Inkubuj kulturę binarną w warunkach mikrotlenowych, które są optymalne dla bakterii gospodarza.
Składniki odżywcze zawarte w pożywce sprzyjają wzrostowi i namnażaniu się bakterii gospodarza, powodując zmętnienie kultury.
Ze względu na swój obligatoryjny pasożytniczy charakter, sacharybakterie przyczepiają się do powierzchni komórek bakteryjnych gospodarza.
Bakterie te następnie tworzą ścisłe kontakty błonowe z gospodarzem i pobierają składniki odżywcze niezbędne do ich przetrwania i namnażania.
W miarę postępu infekcji wzrost bakteryjnego gospodarza spowalnia, co skutkuje zmniejszeniem zmętnienia.
Aby wspierać ciągły wzrost, przenoś kulturę binarną do świeżej pożywki w regularnych odstępach czasu.
Utrzymuje to żywotność gospodarza i sprzyja długoterminowej stabilności kultury binarnej.
Przygotować probówki hodowlane, dodając do nich dwa mililitry odpowiedniej pożywki wzrostowej.
Następnie do każdej probówki dodać 200 mikrolitrów nocnej hodowli organizmów gospodarza i 100 do 200 mikrolitrów ponownie zawieszonej przefiltrowanej próbki. Połączone próbki należy inkubować w warunkach odpowiednich dla organizmu żywiciela. Pasażuj komórki co dwa do trzech dni, przenosząc 200 mikrolitrów kultury binarnej do dwóch mililitrów świeżej pożywki wzrostowej w nowej probówce.
Jeśli pasażowane kultury nie wykazują wzrostu przy 200 mikrolitrach niezakażonej kultury gospodarza, podczas pasażowania komórek należy zwrócić zaszczepione probówki do inkubatora.