JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:41 min. • September 26th, 2025
Zacznij od pastylki bakteryjnej. Bakterie zawierają gen kodujący białko inicjujące, ale nie mają genu oporności na antybiotyki.
Ponownie zawiesić osad w schłodzonej wodzie, aby zminimalizować degradację komórkową.
Weźmy plazmid przenoszący gen oporności na antybiotyki i gen docelowy. Ten plazmid nazywany jest plazmidem samobójczym, ponieważ nie może się replikować bez białka inicjującego.
Dodaj plazmid do zawiesiny bakteryjnej.
Przenieść zawiesinę do schłodzonej kuwety.
Zainicjuj elektroporację, przykładając impuls o wysokim napięciu, który przejściowo rozrywa błonę bakteryjną, umożliwiając wejście plazmidu.
Dodaj pożywkę regeneracyjną i przenieś mieszaninę do probówki hodowlanej.
Inkubować z potrząsaniem.
Weź płytkę agarową zawierającą antybiotyk i ułóż na niej posiew.
Białko inicjujące bakterię wiąże się z początkiem replikacji, umożliwiając plazmidowi replikację i ekspresję białka oporności na antybiotyki.
Dzięki temu bakterie z plazmidem mogą przetrwać i rosnąć, ułatwiając amplifikację plazmidu.
Osadzaj kulturę bakterii przez odwirowanie w temperaturze 5 000 razy G i czterech stopniach Celsjusza przez 15 minut. Zawieś granulat w schłodzonej wodzie destylowanej i powtórz proces czyszczenia
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych