Wychwyt DNA indukowany kompetencjami w Staphylococcus aureus

Weźmy posiew S. aureus wrażliwy na antybiotyk chloramfenikol.

Odwirować w celu osadzenia bakterii i usunięcia supernatantu.

Przenieść osad do probówki zawierającej pożywkę ograniczającą składniki odżywcze i inkubować. Stres związany ze składnikami odżywczymi zwiększa kompetencje – zdolność bakterii do internalizacji obcego DNA.

Ponownie odwirować i usunąć supernatant. Zawiesić osad w świeżych pożywkach ograniczających składniki odżywcze.

Następnie dodaj DNA wyekstrahowane ze szczepu S. aureus niosącego gen oporności na chloramfenikol. Inkubować.

Maszyneria wychwytu DNA przetwarza DNA w pojedynczą nić i przenosi je do cytoplazmy, gdzie integruje się z chromosomem bakteryjnym.

Odwirować i usunąć supernatant. Zawiesić osad w pożywce bogatej w składniki odżywcze.

Przenieść zawiesinę do stopionego, bogatego w składniki odżywcze agaru zawierającego chloramfenikol.

Wlej mieszaninę do naczynia i inkubuj.

Wzrost kolonii opornych na chloramfenikol wskazuje na pomyślne wychwytywanie DNA.

Hoduj komórkę biorczą przez noc w pięciu mililitrach TSB w temperaturze 37 stopni Celsjusza z potrząsaniem. Następnego ranka przenieś 0,5 mililitra nocnej kultury do 1,5 mililitrowej probówki.

Wytrącić komórki przez odw