Wielodołkowy test na bazie płynu do badań przesiewowych nokautów C. elegans
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:35 min. • September 26th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą podłoże agarowe wstępnie nakrapiane bakteriami RNAi, z lub bez wkładki specyficznej dla genu ukierunkowanej na gen C. elegans .
Wysiewanie zsynchronizowało robaki w stadium L1 ze studzienkami i inkubowało je, aby umożliwić odżywianie się bakteriami RNAi.
Wstawka wytwarza interferujące RNA, które celuje w określone geny robaków, generując fenotyp nokautu specyficzny dla genu.
Dodaj bufor do studzienek i delikatnie ponownie zawieś robaki.
Przenieś zawiesinę na płytę głębinową i pozwól robakom osiąść grawitacyjnie.
Usunąć supernatant, zachowując pewien bufor.
Umyj robaki buforem, a następnie wyrzuć supernatant, pozostawiając niewielką ilość buforu.
Następnie weź wielodołkową płytkę testową zawierającą bakterie chorobotwórcze.
Dozuj określoną liczbę robaków kontrolnych i knockdown do odpowiednich studzienek, aby umożliwić interakcje gospodarz-patogen. Bakterie chorobotwórcze wydzielają związki, które indukują śmiertelność robaków.
Porównaj śmiertelność robaków, aby ocenić wpływ specyficznego dla genu knockdownu na przeżycie robaków.
Dodaj jeden mililitr S Basal na dołek 24-dołkowej płytki zawierającej 300 robaków na studzienkę. Delikatnie porusz robaki, potrzą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych