Ocena śmiertelności larw C. elegans wywołanej przez bakterie chorobotwórcze

Zacznij od chorobotwórczej bakterii wyhodowanej na agare.

Zeskrob bakterie, zawieś je w buforze i dodaj pożywkę, aby utrzymać żywotność bakterii.

Dozować zawiesinę do mikropłytki.

Następnie weź oddzielne szczepy larw C. elegans , o zwiększonej podatności na patogeny lub o zwiększonej odporności, i pozwól im się osiedlić.

Usunąć supernatant, ponownie zawiesić larwy w świeżym podłożu i przenieść je do mikropłytki zawierającej bakterie.

Uszczelnić mikropłytkę membraną przepuszczającą gaz i rozpocząć inkubację. Bakterie wydzielają toksyczne metabolity, które aktywują szlaki stresu i prowadzą do śmierci komórki.

Umyj studzienki, aby wyeliminować bakterie, dodaj nieprzepuszczalny dla komórek barwnik fluorescencyjny i inkubuj.

Barwnik wnika tylko do martwych komórek larwalnych z przerwanymi błonami i wiąże się z ich kwasami nukleinowymi.

Umyj w celu usunięcia nadmiaru barwnika i zobrazuj fluorescencyjnie zabarwione robaki, aby ocenić śmiertelność wrażliwych i opornych szczepów.

Aby przeprowadzić test zabijania cieczy, użyj skrobaka do komórek, aby usunąć P. aeruginosa z płytki SK i ponownie zawiesić bakterie w około 5 mililitrach S Basal.

Za pomocą spektrofotometru zmierz OD 600 zawiesiny bakteryjn