JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:14 min. • September 26th, 2025
Zacznij od morskiego bioluminescencyjnego szczepu bakteryjnego przenoszącego operon luminescencyjny, który koduje lucyferazy i enzymy niezbędne do syntezy substratu.
Rozprowadź szczep na bogatej w składniki odżywcze płycie agarowej uzupełnionej sztuczną wodą morską, aby naśladować rodzime zasolenie i wspomagać wzrost.
Inkubować, aby uzyskać dyskretne kolonie, a następnie wyizolować i zaszczepić pojedynczą kolonię w płynnym podłożu zawierającym sztuczną wodę morską.
Inkubuj z mieszaniem, aby promować wzrost z dnia na dzień w fazie wykładniczej.
Przenieś określoną objętość nocnej kultury do świeżej pożywki i inkubuj ją w celu zwiększenia gęstości bakterii.
Wraz ze wzrostem populacji bakterie uwalniają autoinduktory, cząsteczki sygnałowe, które gromadzą się i dyfundują do komórek, gdzie wiążą się z receptorami wewnątrzkomórkowymi, aktywując operon luminescencyjny.
Ta aktywacja indukuje ekspresję lucyferazy i biosyntezę substratu.
Lucyferazy katalizują utlenianie substratu, emitując niebiesko-zielone światło.
Monitorowanie hodowli pod kątem bioluminescencji jako wskaźnika aktywacji operonów luminescencyjnych i emisji światła u bakterii morskich.
Po przygotowaniu pożywki zgodnie z protokołem tekstowym, szczepy bioluminescencyjne bakterii należy rozprowadzić na płytkach agarowych ze sztucznej wody morskiej i inkubować je w temperaturze od 24 do 30 stopni Celsjusza przez noc.
Przygotuj kulturę na noc, zaszczepiając 100 mililitrów sztucznej pożywki z wodą morską pojedynczą kolonią z płytki. Następnie inkubuj kulturę w temperaturze od 24 do 30 stopni Celsjusza i 120 obr./min przez noc. Następnego dnia zaszczepij 800 mililitrów sztucznej pożywki z wodą morską za pomocą 8 mililitrów kultury przez noc.
Inkubuj komórki bakteryjne w temperaturze od 24 do 30 stopni Celsjusza i 120 obr./min i obserwuj komórki, aż zaczną świecić.