JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:27 min. • September 26th, 2025
Zacznij od hodowli E. coli wstępnie potraktowanej antybiotykiem.
Antybiotyk ten blokuje podziały komórkowe, w wyniku czego powstają wydłużone komórki nitkowate o zwiększonej zawartości DNA.
Umieść porcję kultury na bogatej w składniki odżywcze płytce agarowej i inkubuj.
Komórki nitkowate nie dzielą się pomimo ciągłego wzrostu; Tylko komórki nienitkowate tworzą kolonie, co skutkuje niską liczbą kolonii.
Rozcieńczyć pozostałą kulturę bakteryjną i dodać fluorescencyjny barwnik wiążący DNA. Następnie wysiaduj w ciemności.
Barwnik dostaje się do komórek i wiąże się z DNA.
Odwirować próbkę, a następnie przepuścić ją przez cytometr przepływowy.
Ilość rozproszonego światła z każdej komórki odpowiada jej rozmiarowi.
Podobnie fluorescencja emitowana przez kwasy nukleinowe związane z barwnikiem wskazuje na zawartość bakteryjnego DNA.
Komórki poddane działaniu antybiotyków wykazują zwiększone rozproszenie i fluorescencję, co odzwierciedla nitkowaty wzrost i ciągłą replikację DNA bez podziału.
Świadczy to o modyfikacjach w fizjologii bakterii spowodowanych przez antybiotyki hamujące podziały komórkowe.
Przygotować dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia, do 10 do minus siódmej, z 200 mikrolitrów próbki hod
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych