JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:50 min. • September 26th, 2025
Zacznij od hodowli gatunku bakterii, który koduje rekombinowane białka oznaczone peptydem zarodkującym pęcherzyki lub VNp, krótkim peptydem, który sprzyja tworzeniu pęcherzyków.
Dodaj induktor do kultury i inkubuj. Induktor wyzwala ekspresję białka.
VNp osadza się w błonie wewnętrznej i wspomaga krzywiznę błony, zamykając białka znakowane VNp w pączkujących pęcherzykach.
Przenieś pożywkę bogatą w pęcherzyki do probówki. Odwirować go, aby oddzielić supernatant bogaty w pęcherzyki.
Następnie przefiltruj supernatant, aby usunąć resztki zanieczyszczeń.
Następnie przepuść filtrat przez inny filtr membranowy, aby wychwycić pęcherzyki na powierzchni membrany.
Umieść membranę w naczyniu i dodaj sól fizjologiczną buforowaną fosforanami.
Delikatnie odłączyć pęcherzyki i przenieść zawiesinę do czystej tubki.
Sonizować zawiesinę, aby rozerwać błony pęcherzykowe i uwolnić białka.
Odwirować lizat w celu oddzielenia fragmentów błony.
Otrzymany supernatant zawiera oczyszczone białka rekombinowane, gotowe do analizy.
Indukuj ekspresję białka rekombinowanego z promotora T7, dodając IPTG do końcowego stężenia do 20 mikrogramów na mililitr lub 84 mikromolowe. Po pozostawieniu wystarczającej ilości czasu na induk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych