JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:23 min. • September 26th, 2025
Rozpocząć od buforowanej mieszaniny reakcyjnej zawierającej L-metioninę, donor elektronów, tetrazolium nitro blue lub NBT, wskaźnik redoks i mononukleotyd flawinowy lub FMN, fotouczulacz.
Dodaj tę mieszaninę do probówki zawierającej osad bakteryjny i wir.
Przenieś roztwór do szklanej probówki.
Teraz naświetl mieszaninę światłem fioletowym, aby aktywować FMN, który przyjmuje elektron z L-metioniny, tworząc reaktywny produkt pośredni.
Ten produkt pośredni przenosi elektron do rozpuszczonego tlenu cząsteczkowego, generując reaktywne formy tlenu lub ROS w pobliżu powierzchni bakterii.
Powstały ROS uszkadza składniki komórkowe i zmniejsza żywotność bakterii.
ROS redukuje również NBT do formazanu, produktu o niebieskim kolorze, który osadza się w pobliżu powierzchni bakterii.
Przenieść mieszaninę do probówki, odwirować ją i wyrzucić supernatant.
Zawiesić osad w rozpuszczalniku organicznym w celu rozpuszczenia formazanu.
Na koniec zmierz absorbancję, aby określić inaktywację bakterii indukowaną światłem poprzez wytwarzanie ROS.
Przygotować próbki Staphylococcus aureus zgodnie z wcześniejszym opisem, aby uzyskać osad komórkowy. Do 75 mililitrów buforu fosforanowego dodaj 0,1093 grama L-metioniny, 0,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych