JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:19 min. • September 26th, 2025
Należy wziąć strzykawki zawierające paski polimerowe wolne od antybiotyków i zawierające antybiotyki.
Napełnić strzykawki metabolicznie aktywną kulturą bakterii chorobotwórczych.
Inkubować strzykawki, wstrząsając, aby zapewnić równomierną ekspozycję bakterii na podłoże.
Podczas inkubacji antybiotyki z załadowanego paska dyfundują do pożywki i hamują rozwój bakterii.
W strzykawce z paskiem bez antybiotyków bakterie namnażają się.
Zebrać zawiesinę bakteryjną z każdej strzykawki do probówek do mikrowirówek.
Przenieść podwielokrotności na płytkę wielodołkową.
Dodaj mieszaninę odczynników zawierającą lucyferynę, enzym lucyferazy i środek do lizy.
Inkubuj z wytrząsaniem, aby umożliwić lizę bakteryjną, która uwalnia składniki komórkowe, w tym ATP. ATP napędza reakcję luminescencyjną, w której pośredniczy lucyferaza.
Za pomocą czytnika mikropłytek zapisz luminescencję.
Kultura bakteryjna wystawiona na działanie paska obciążonego antybiotykiem wykazuje zmniejszoną luminescencję w porównaniu z kulturą niewystawioną na działanie antybiotyków.
Ta zmniejszona luminescencja potwierdza skuteczność przeciwbakteryjną paska wypełnionego antybiotykiem.
Umieść paski UHMWPE z pierwszego tłoczenia i zawierające lek w trzymililitrowej strzykawce. Następnie wciągnąć zawiesinę bakteryjną zawierającą MHB do strzykawki przez dołączoną igłę do oznaczenia 1,5 mililitra.
Umieścić zestaw strzykawki w inkubatorze z wytrząsaniem do wskazanego punktu czasowego wynoszącego sześć godzin, a następnie codziennie do siódmego dnia. Po każdym wskazanym punkcie czasowym wyjmij zestaw strzykawki i dozuj pożywkę do dwumililitrowej probówki. Wykonaj test żywotności mikrobiologicznej w czasie rzeczywistym, jak opisano w manuskrypcie, używając 100 mikrolitrów zawiesiny bakteryjnej.