JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:28 min • October 30th, 2025
Weźmy hodowlę Corynebacterium glutamicum, przekształconą plazmidem przenoszącym fluorescencyjny gen reporterowy poniżej antyterminatora kwasu rybonukleinowego lub sekwencji RAT, na płytce wielodołkowej.
Podczas transkrypcji RNA szczura tworzy strukturę pętli macierzystej, która blokuje polimerazę RNA, zatrzymując ekspresję genu reporterowego.
Plazmid konstytutywnie ulega również ekspresji LicV, białka fuzyjnego składającego się z białka wiążącego RAT-RNA, LicT i wrażliwej na światło niebieskie domeny VVD.
W ciemności LicV pozostaje monomeryczny i nie wiąże się z pętlą macierzystą RAT-RNA, która blokuje transkrypcję genu reporterowego.
Oświetl kulturę niebieskim światłem, aby wywołać zmianę konformacyjną w domenie VVD, która wyzwala dimeryzację LicV.
Dimeryzowany LicV wiąże się z RAT-RNA, rozwijając strukturę pętli macierzystej i umożliwiając polimerazie RNA transkrypcję genu reporterowego, wytwarzając fluorescencyjne białko reporterowe.
Obserwuj kulturę pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Silna fluorescencja reporterowa po oświetleniu światłem niebieskim i minimalna fluorescencja w ciemności potwierdza skuteczną kontrolę optogenetyczną.